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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] RFLP酶切 已有1人参与

我想做RFLP分析环境中微生物的多态性，现在要做pcr产物的酶切。我现在是将pcr产物克隆到载体上，请问是直接用pcr产物进行酶切呢，还是将pcr产物克隆后从载体上切下来后再做酶切呢？
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1楼 2009-07-27 15:35:12
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第十一维

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好先纯化，然后酶切效果就好
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讲学习进行到底
2楼2009-07-27 17:04:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
P出来后过柱纯化，然后酶切，无需克隆
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3楼2009-07-27 17:09:28
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009/7/27 17:09:
P出来后过柱纯化，然后酶切，无需克隆

这样的话，除了琼脂糖凝胶电泳检测目的片段外，如何知道酶切的片段就是目的片段呢？或许会有相差不大的片段呢
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4楼2009-07-28 08:15:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那第一次扩出来后就去测个序看看是不是特异产物，ok的话就一直用这个条件做下去
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5楼2009-07-28 10:06:26
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009/7/28 10:06:
那第一次扩出来后就去测个序看看是不是特异产物，ok的话就一直用这个条件做下去

我曾用pcr产物直接测序过，结果是有相差不大的片段产生，最大相差在50个碱基以内。这样做RFLP酶切的话可靠性会如何？
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6楼2009-07-28 21:10:47
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凌-强

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我在做粪便微生物多样性，交流下，我问过老板，老板说是直接拿克隆子PCR,然后就可以直接酶切了，没必要做什么纯化，我正准备试试，还不知道行不行，反正我们那老板倒是一直直接酶切的
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7楼2011-03-14 11:18:47
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