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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] RFLP酶切 已有1人参与

我想做RFLP分析环境中微生物的多态性,现在要做pcr产物的酶切。我现在是将pcr产物克隆到载体上,请问是直接用pcr产物进行酶切呢,还是将pcr产物克隆后从载体上切下来后再做酶切呢?
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第十一维

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最好先纯化,然后酶切效果就好
讲学习进行到底
2楼2009-07-27 17:04:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
P出来后过柱纯化,然后酶切,无需克隆
3楼2009-07-27 17:09:28
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greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009/7/27 17:09:
P出来后过柱纯化,然后酶切,无需克隆

这样的话,除了琼脂糖凝胶电泳检测目的片段外,如何知道酶切的片段就是目的片段呢?或许会有相差不大的片段呢
4楼2009-07-28 08:15:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那第一次扩出来后就去测个序看看是不是特异产物,ok的话就一直用这个条件做下去
5楼2009-07-28 10:06:26
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greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009/7/28 10:06:
那第一次扩出来后就去测个序看看是不是特异产物,ok的话就一直用这个条件做下去

我曾用pcr产物直接测序过,结果是有相差不大的片段产生,最大相差在50个碱基以内。这样做RFLP酶切的话可靠性会如何?
6楼2009-07-28 21:10:47
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凌-强

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在做粪便微生物多样性,交流下,我问过老板,老板说是直接拿克隆子PCR,然后就可以直接酶切了,没必要做什么纯化,我正准备试试,还不知道行不行,反正我们那老板倒是一直直接酶切的
7楼2011-03-14 11:18:47
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