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[求助]
预期的链置换信号放大反应没有发生 已有1人参与
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求助各位大佬，本人在做分子信标识别（MB）和信号放大方面的工作，T是靶标核酸链，B是理论上能将与MB结合的T替换下来，游离的T再次与MB反应，以实现T的量放大的效果。具体步骤如下： 1、MB探针溶于缓冲溶液（10mM Tris-HCl，2mM EDTA，5mM MgCl2），95℃加热5min，缓慢冷却至4℃，得到发夹状MB。B直接溶于缓冲溶液备用（10mM Tris-HCl，2mM EDTA）。 2、取MB于PBS溶液中，37℃孵育30min。测定荧光强度记作F0。 3、取MB和T适量于PBS溶液中，37℃孵育30min。测定荧光强度记作F1。 4、取MB和B适量于PBS溶液中，37℃孵育30min。测定荧光强度记作F2。 5、取MB和T适量于PBS溶液中，37℃孵育30min。取出，加入B探针，37℃孵育30min。测定荧光强度记作F3。 以上反应，MB:T:B为10：1：5。 结果发现荧光强度F0<F1<F2≈F3，理论上F3是明显大于F2的，不知为何，检测到的信号强度没有明显提高。目前推测是链B没有将T置换以致F2与F3相近，不知各位大佬有无别的看法，或者具体一些的建议？ |
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