| 查看: 1251 | 回复: 7 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 飞不动D鸟 的 5 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会 | |||
[交流]
质粒pYES2转化酵母没有转化子出现
|
|||
|
各位前辈： 我最近在做酵母的转化实验，用到两个质粒一个是cas9质粒一个是pYES2质粒，用醋酸锂转化法，具体方法如下： 1. 挑取单克隆酵母BY4741于10 ml YPD培养基中，30℃，250 rpm过夜培养。 2. 测定过夜培养之后的OD600，转接于50 ml YPD培养基中，使初始OD600=0.4，细胞数目约为5×106 。继续培养2-4 h，使OD600=1.3-1.5，细胞个数约为2×107。 3. 用50 ml 离心管，2500 rpm，5 min 离心，收集菌体，在40 ml 1×TE悬浮。 4. 2500 rpm，5 min 离心，去上清，收集菌体重悬于2 ml 1×LiAc/0.5 TE 中。 5. 在室温下静置10 min。 6. 然后依次加入1 μg的质粒，100 μl的酵母悬液，700 μl 1×LiAc/40%PEG3350/1×TE，剧烈振荡1 min 。在30℃情况下孵育30 min。 7. 加入88 μl DMSO，混匀，在42℃下热激7min（或20 min-25 min） 8. 2500 rpm ，5 min 离心，去除上清，在200 μl 1× TE中重悬。 9. 涂布于选择培养基含有G418的培养基（G418浓度：200 μg/ml） 10. 将平板在30 ℃培养2-3天。 可是连着做了几次了平板上都没有转化子出现，想问下大家问题出在哪里了，或者有什么可以改进的地方吗. |
回复此楼» 猜你喜欢
垃圾破二本职称评审标准
已经有18人回复
-
职称评审没过，求安慰
已经有53人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有5人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
散金祈福
+1/613
-
双一流南京医科大学招计算机、AI、统计、生物信息等方向26年9月入学博士
+1/183
-
山东大学宋维业老师课题组招收光学、自动化控制、深度学习方向博士生
+1/176
-
【宁德时代招聘】AI 物理学家
+1/176
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/82
-
博士招生
+1/36
-
国家青年人才叶立群教授课题组招收2026级博士研究生
+1/30
-
人到中年，还能干啥
+1/21
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/18
-
杭州师范大学心理系赛李阳课题组招收2026年学术学位博士研究生
+1/9
-
海南师范大学招收化学博士（光电功能材料课题组招收博士研究生）
+1/8
-
招收2026级博士
+1/8
-
北京师范大学与企业联合招聘博士后、全职、兼职人员
+1/7
-
海南师范大学招收化学博士（光电功能材料课题组招收博士研究生）
+1/6
-
新加坡南洋理工大学材料科学与工程学院招收博士研究生 (2026年8月入学)
+1/6
-
浙江大学杨林课题组招聘药物化学与有机合成方向博士后
+1/3
-
诚招“先进材料与柔性电子（柔性储能或柔性天线）”方向联培博士生
+1/3
-
英国兰卡斯特大学（Lancaster University）大模型、计算机视觉PhD招生
+1/2
-
有没有做核磁共振系统的虫友呢
+1/2
-
长安大学罗刚课题组招聘科研助理-隧道通风/爆破相关研究方向
+1/1
3楼2020-09-12 00:08:04
7楼2020-09-17 10:24:00
8楼2021-12-23 06:51:58
简单回复
tzynew2楼
2020-09-11 12:54
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
1
斓曦20194楼
2020-09-12 06:25
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
nono20095楼
2020-09-12 16:25
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
·
2020-09-14 08:17
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
