| 查看: 1340 | 回复: 7 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 飞不动D鸟 的 5 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会 | |||
[交流]
质粒pYES2转化酵母没有转化子出现
|
|||
|
各位前辈： 我最近在做酵母的转化实验，用到两个质粒一个是cas9质粒一个是pYES2质粒，用醋酸锂转化法，具体方法如下： 1. 挑取单克隆酵母BY4741于10 ml YPD培养基中，30℃，250 rpm过夜培养。 2. 测定过夜培养之后的OD600，转接于50 ml YPD培养基中，使初始OD600=0.4，细胞数目约为5×106 。继续培养2-4 h，使OD600=1.3-1.5，细胞个数约为2×107。 3. 用50 ml 离心管，2500 rpm，5 min 离心，收集菌体，在40 ml 1×TE悬浮。 4. 2500 rpm，5 min 离心，去上清，收集菌体重悬于2 ml 1×LiAc/0.5 TE 中。 5. 在室温下静置10 min。 6. 然后依次加入1 μg的质粒，100 μl的酵母悬液，700 μl 1×LiAc/40%PEG3350/1×TE，剧烈振荡1 min 。在30℃情况下孵育30 min。 7. 加入88 μl DMSO，混匀，在42℃下热激7min（或20 min-25 min） 8. 2500 rpm ，5 min 离心，去除上清，在200 μl 1× TE中重悬。 9. 涂布于选择培养基含有G418的培养基（G418浓度：200 μg/ml） 10. 将平板在30 ℃培养2-3天。 可是连着做了几次了平板上都没有转化子出现，想问下大家问题出在哪里了，或者有什么可以改进的地方吗. |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿北京2，材料与化工308求调剂
已经有8人回复
-
材料调剂
已经有8人回复
-
一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂
已经有24人回复
-
283求调剂
已经有8人回复
-
290求调剂
已经有7人回复
-
266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂
已经有12人回复
-
285求调剂
已经有8人回复
-
288环境专硕,求调材料方向
已经有13人回复
-
考研调剂
已经有10人回复
-
298分 070300求调剂
已经有13人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中国石油大学（北京） 化学工程专业招2026级博士
+1/475
-
浙江理工大学物理系招收物理学和光电信息调剂生
+2/158
-
武汉大学与浙江师范大学/武汉工程大学联合培养硕士研究生调剂招生
+1/88
-
攀枝花学院大量招收调剂：材料科学与工程(学硕：0805)和材料工程（专硕：0856）
+1/61
-
欢迎材料、化工、林业工程等相关方向学生报考/调剂 福建农林大学
+1/37
-
华南师范大学（211）招收物理、生物、生物医学工程调剂生
+1/37
-
企业出国访问交流求助
+1/37
-
煤炭科学研究总院招收2026年生态学专业硕士调剂生1名
+1/20
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/8
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/8
-
长江师范学院化学工程方向接收大量硕士研究生调剂考生
+1/8
-
【调剂上岸】985联合培养！1007/1055/08/07等，不限专业，想联培的速来！
+1/8
-
陕西理工大学材料学院新能源团队招调剂生！！！
+1/5
-
烟台大学化学化工学院班庆福课题组招收调剂生
+1/5
-
长江师范学院化学化工学院化学工程方向接收大量调剂考生
+1/4
-
西南石油大学招收2026年“申请-考核“博士研究生 方向：不对称催化氢化
+1/4
-
2026年云南大学青拔课题组招收地理学，大气科学、资源与环境等专业研究生
+1/3
-
湖北师范大学 材料科学与工程学院接收2026考研调剂
+1/2
-
211/双一流---石河子大学---有机化学方向招调剂生
+1/2
-
天津工业大学双一流高校招博士、调剂硕士、博士后
+1/1
3楼2020-09-12 00:08:04
7楼2020-09-17 10:24:00
8楼2021-12-23 06:51:58
简单回复
tzynew2楼
2020-09-11 12:54
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
1
斓曦20194楼
2020-09-12 06:25
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
nono20095楼
2020-09-12 16:25
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
·
2020-09-14 08:17
回复
飞不动D鸟(金币+1): 谢谢参与
