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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)


[交流] 枯草芽孢杆菌转化相关疑问

有没有做枯草芽孢杆菌表达的老师,有几个问题想请教各位老师

1)请问枯草芽孢杆菌转化后过夜培养一般多久会长出阳性菌落?我试了加海藻糖电转和张晓舟老师的化学转化法,一般都要在16h之后才会长出一点点,而且菌落是很小的圆点,做菌落PCR鉴定也没有条带,只有一次过夜培养12h不到就长出大一点的圆点,白色的,但是菌落PCR还是没有条带。请问大家做枯草转化一般多久有结果,菌落形态是什么样子的,如果方便的话有图片更好

2)请问枯草芽孢杆菌可以菌落PCR鉴定吗?我是用白色枪头挑取小菌落到10ul水里,95℃加热10分钟,再-20℃放置5分钟,高速离心取1ul做模板。之前成功过一次,但是最近做了好几次都没有条带,请问是不是PCR方法不对导致结果不稳定。请问大家都是怎么鉴定的,接种液体提质粒吗?

3)请问枯草芽孢杆菌转化最后涂板取多少量,电转我是1ml复苏体系取100ul涂板,涂完是干净的,但是过夜培养后在平板表面像是长出一层像膜一样粗糙沙沙的东西,这种情况正常吗
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酷草芽鲍

新虫 (正式写手)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
化转方法挺方便的,江南大学博士论文或其他论文上有(需要加EGTA的方法),一定要注意抗生素浓度问题,不确定可以做一个梯度,质粒多加点,pcr用菌液比较好,菌落pcr容易假阳性,并且如果菌体多回堵琼脂糖的泳道,导致条带聚集在孔里,跑不下去

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12楼2020-07-28 07:18:48
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按时拉屎

新虫 (小有名气)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
朋友成功了吗  可以一起探讨一下嘛

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15楼2020-12-29 18:03:53
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匿名



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
16楼2020-12-30 00:05:40
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

成liang

铁虫 (初入文坛)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
请问楼主,现在采用什么方法做枯草芽孢杆菌的转化呢?我现在也在做,但是转化不成功
20楼2023-05-04 09:25:24
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
枯草转化so easy,我们天天做,都长满板子的。

发自小木虫Android客户端
5楼2020-07-16 22:03:57
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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
5楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-16 22:03:57
枯草转化so easy,我们天天做,都长满板子的。

您好,请问可以讲一下细节吗
9楼2020-07-17 10:19:22
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)

小冀-: 屏蔽内容, 违规存档, 涉嫌广告,可以提供建议或指导 2020-07-23 09:28:41
本帖内容被屏蔽

10楼2020-07-17 10:52:37
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zhangzhibao

木虫 (正式写手)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
什么方法可以杀死枯草芽孢杆菌,除了湿热灭菌有别的方法吗?84消毒液可以吗

发自小木虫Android客户端
13楼2020-08-25 09:32:24
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wangyuan0929

金虫 (小有名气)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
之前我记得看分子克隆手册的时候,书里不建议对革兰氏阳性菌做菌落PCR来着

最后涂布的问题,要不你试一下做个梯度涂布,看看这个现象和涂布量是否有关
14楼2020-08-25 11:30:59
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按时拉屎

新虫 (小有名气)


引用回帖:
16楼: Originally posted by jpk9999 at 2020-12-30 00:05:40
枯草芽孢杆菌很好做的啊

请问用什么方法呀  化学转化两步法吗 我做电转还没有成功过
17楼2021-01-11 10:05:27
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按时拉屎

新虫 (小有名气)


引用回帖:
9楼: Originally posted by xjqxzlxr at 2020-07-17 10:19:22
您好,请问可以讲一下细节吗...

一起交流下嘛 我也是做枯草的

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18楼2021-04-01 07:20:19
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起风了521

新虫 (小有名气)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
12楼: Originally posted by 酷草芽鲍 at 2020-07-28 07:18:48
化转方法挺方便的,江南大学博士论文或其他论文上有(需要加EGTA的方法),一定要注意抗生素浓度问题,不确定可以做一个梯度,质粒多加点,pcr用菌液比较好,菌落pcr容易假阳性,并且如果菌体多回堵琼脂糖的泳道,导致 ...

菌落pcr为什么会有假阳性呀
19楼2022-11-18 14:39:40
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高nb

新虫 (初入文坛)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
请问电转做出来了吗?我也是假阳性
21楼2023-08-12 19:29:52
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陈YY@

新虫 (初入文坛)



xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
18楼: Originally posted by 按时拉屎 at 2021-04-01 07:20:19
一起交流下嘛 我也是做枯草的
...

请问还在做吗

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22楼2024-07-12 16:17:55
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2020-07-16 19:48   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
2020-07-16 20:07   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
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tzynew4楼
2020-07-16 21:38   回复  
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syhorchid6楼
2020-07-16 23:20   回复  
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zhuzijack7楼
2020-07-17 07:40   回复  
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u 发自小木虫Android客户端
6804168楼
2020-07-17 07:48   回复  
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6 发自小木虫IOS客户端
2020-07-23 08:32   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
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