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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 枯草芽孢杆菌转化相关疑问
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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)

[交流] 枯草芽孢杆菌转化相关疑问

有没有做枯草芽孢杆菌表达的老师，有几个问题想请教各位老师

1）请问枯草芽孢杆菌转化后过夜培养一般多久会长出阳性菌落？我试了加海藻糖电转和张晓舟老师的化学转化法，一般都要在16h之后才会长出一点点，而且菌落是很小的圆点，做菌落PCR鉴定也没有条带，只有一次过夜培养12h不到就长出大一点的圆点，白色的，但是菌落PCR还是没有条带。请问大家做枯草转化一般多久有结果，菌落形态是什么样子的，如果方便的话有图片更好

2）请问枯草芽孢杆菌可以菌落PCR鉴定吗？我是用白色枪头挑取小菌落到10ul水里，95℃加热10分钟，再-20℃放置5分钟，高速离心取1ul做模板。之前成功过一次，但是最近做了好几次都没有条带，请问是不是PCR方法不对导致结果不稳定。请问大家都是怎么鉴定的，接种液体提质粒吗？

3）请问枯草芽孢杆菌转化最后涂板取多少量，电转我是1ml复苏体系取100ul涂板，涂完是干净的，但是过夜培养后在平板表面像是长出一层像膜一样粗糙沙沙的东西，这种情况正常吗
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1楼2020-07-16 19:30:32
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酷草芽鲍

新虫 (正式写手)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
化转方法挺方便的，江南大学博士论文或其他论文上有(需要加EGTA的方法)，一定要注意抗生素浓度问题，不确定可以做一个梯度，质粒多加点，pcr用菌液比较好，菌落pcr容易假阳性，并且如果菌体多回堵琼脂糖的泳道，导致条带聚集在孔里，跑不下去

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12楼2020-07-28 07:18:48
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
枯草转化so easy，我们天天做，都长满板子的。

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5楼2020-07-16 22:03:57
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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-16 22:03:57
枯草转化so easy，我们天天做，都长满板子的。

您好，请问可以讲一下细节吗
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9楼2020-07-17 10:19:22
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
小冀-: 屏蔽内容, 违规存档, 涉嫌广告，可以提供建议或指导 2020-07-23 09:28:41
本帖内容被屏蔽
10楼2020-07-17 10:52:37
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斓曦20193楼
2020-07-16 20:07   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
tzynew4楼
2020-07-16 21:38   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
9 发自小木虫Android客户端
zhuzijack7楼
2020-07-17 07:40   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
u 发自小木虫Android客户端
6804168楼
2020-07-17 07:48   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
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