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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 枯草芽孢杆菌转化相关疑问
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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)

[交流] 枯草芽孢杆菌转化相关疑问

有没有做枯草芽孢杆菌表达的老师，有几个问题想请教各位老师

1）请问枯草芽孢杆菌转化后过夜培养一般多久会长出阳性菌落？我试了加海藻糖电转和张晓舟老师的化学转化法，一般都要在16h之后才会长出一点点，而且菌落是很小的圆点，做菌落PCR鉴定也没有条带，只有一次过夜培养12h不到就长出大一点的圆点，白色的，但是菌落PCR还是没有条带。请问大家做枯草转化一般多久有结果，菌落形态是什么样子的，如果方便的话有图片更好

2）请问枯草芽孢杆菌可以菌落PCR鉴定吗？我是用白色枪头挑取小菌落到10ul水里，95℃加热10分钟，再-20℃放置5分钟，高速离心取1ul做模板。之前成功过一次，但是最近做了好几次都没有条带，请问是不是PCR方法不对导致结果不稳定。请问大家都是怎么鉴定的，接种液体提质粒吗？

3）请问枯草芽孢杆菌转化最后涂板取多少量，电转我是1ml复苏体系取100ul涂板，涂完是干净的，但是过夜培养后在平板表面像是长出一层像膜一样粗糙沙沙的东西，这种情况正常吗
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1楼 2020-07-16 19:30:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

酷草芽鲍

新虫 (正式写手)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
化转方法挺方便的，江南大学博士论文或其他论文上有(需要加EGTA的方法)，一定要注意抗生素浓度问题，不确定可以做一个梯度，质粒多加点，pcr用菌液比较好，菌落pcr容易假阳性，并且如果菌体多回堵琼脂糖的泳道，导致条带聚集在孔里，跑不下去

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12楼2020-07-28 07:18:48
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按时拉屎

新虫 (小有名气)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
朋友成功了吗  可以一起探讨一下嘛

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15楼2020-12-29 18:03:53
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匿名


★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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16楼2020-12-30 00:05:40
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成liang

铁虫 (初入文坛)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
请问楼主，现在采用什么方法做枯草芽孢杆菌的转化呢？我现在也在做，但是转化不成功
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20楼2023-05-04 09:25:24
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
枯草转化so easy，我们天天做，都长满板子的。

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5楼2020-07-16 22:03:57
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xjqxzlxr

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-16 22:03:57
枯草转化so easy，我们天天做，都长满板子的。

您好，请问可以讲一下细节吗
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9楼2020-07-17 10:19:22
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
小冀-: 屏蔽内容, 违规存档, 涉嫌广告，可以提供建议或指导 2020-07-23 09:28:41
本帖内容被屏蔽
10楼2020-07-17 10:52:37
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zhangzhibao

木虫 (正式写手)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
什么方法可以杀死枯草芽孢杆菌，除了湿热灭菌有别的方法吗？84消毒液可以吗

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13楼2020-08-25 09:32:24
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wangyuan0929

金虫 (小有名气)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
之前我记得看分子克隆手册的时候，书里不建议对革兰氏阳性菌做菌落PCR来着

最后涂布的问题，要不你试一下做个梯度涂布，看看这个现象和涂布量是否有关
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14楼2020-08-25 11:30:59
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按时拉屎

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jpk9999 at 2020-12-30 00:05:40
枯草芽孢杆菌很好做的啊

请问用什么方法呀  化学转化两步法吗 我做电转还没有成功过
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17楼2021-01-11 10:05:27
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按时拉屎

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xjqxzlxr at 2020-07-17 10:19:22
您好，请问可以讲一下细节吗...

一起交流下嘛 我也是做枯草的

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18楼2021-04-01 07:20:19
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起风了521

新虫 (小有名气)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
12楼: Originally posted by 酷草芽鲍 at 2020-07-28 07:18:48
化转方法挺方便的，江南大学博士论文或其他论文上有(需要加EGTA的方法)，一定要注意抗生素浓度问题，不确定可以做一个梯度，质粒多加点，pcr用菌液比较好，菌落pcr容易假阳性，并且如果菌体多回堵琼脂糖的泳道，导致 ...

菌落pcr为什么会有假阳性呀
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19楼2022-11-18 14:39:40
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高nb

新虫 (初入文坛)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
请问电转做出来了吗？我也是假阳性
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21楼2023-08-12 19:29:52
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陈YY@

新虫 (初入文坛)
★
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
18楼: Originally posted by 按时拉屎 at 2021-04-01 07:20:19
一起交流下嘛 我也是做枯草的
...

请问还在做吗

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22楼2024-07-12 16:17:55
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xiaoqiuqiu202楼
2020-07-16 19:48   回复  
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斓曦20193楼
2020-07-16 20:07   回复  
xjqxzlxr(金币+1): 谢谢参与
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tzynew4楼
2020-07-16 21:38   回复  
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syhorchid6楼
2020-07-16 23:20   回复  
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zhuzijack7楼
2020-07-17 07:40   回复  
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u 发自小木虫Android客户端
6804168楼
2020-07-17 07:48   回复  
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miaojiabing11楼
2020-07-23 08:32   回复  
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