应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
151/1返回列表
查看: 1611  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1772701

新虫 (初入文坛)
已领完
载体构建
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

我有一个400bp和882bp的片段需要构建过表达载体，但是现在基因一直扩不出来！！感觉要疯了，使用的是酶切位点?cds序列前后20bp的引物，现在梯度也试了，要么是没条带要么就是扩不出目的条带！用的日本晴种子cDNA，两个基因都在根和种子中表达，现在不想扩了根本不知道怎么办了！是我酶切位点找的有问题吗 都是直接网上搜的 引物是去掉了酶切位点后面的保护碱基?20bp 这么一个序列 F和R都是这个方法设计的。希望各位路过的大佬给点意见和建议！！！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2020-05-23 22:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

等你的时候

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基因扩不出，和酶切位点没有关系，应该从模板和扩增上找原因

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2020-05-24 06:59:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glowinthesky

新虫 (初入文坛)
不想扩了直接找公司合成呗，这么小的片段又不贵。舍不得钱就用gDNA扩了拼起来。gDNA也扩不出，那你得重新学学引物设计了
赞一下 回复此楼
13楼2020-10-14 16:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵鑫易

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同上，合成或者公司亚克隆。自己不熟悉的话可能很久才做出来

实在是要自己P，比如以后分子实验做很多的话往下看。
1.先做个阳性对照确定cDNA、反应条件没问题，选一个曾经P出来的基因一起P

2.增大容错率，力所能及的使用最好的酶

3.引物不止看20bp，看具体tm值。也可去NCBI上尝试blast

4.多找几个引物对
赞一下 回复此楼
14楼2020-10-15 19:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuying0421

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先看看找的序列对不对，各个数据库注释不一样。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2021-02-05 22:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
herethere2楼
2020-05-23 22:41   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
立林2583693楼
2020-05-23 22:42   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
stupidboy234楼
2020-05-23 22:42   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
HK驱魔者5楼
2020-05-23 22:43   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
abc8765244086楼
2020-05-23 22:45   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
黑不溜秋珍7楼
2020-05-23 22:46   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
秋土豆香8楼
2020-05-23 22:48   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
快乐小磁场9楼
2020-05-23 22:49   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
SunLapse10楼
2020-05-23 22:53   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
xg111111楼
2020-05-23 22:58   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 1772701 的主题更新
151/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 0703化学求调剂 +4 奶油草莓. 2026-03-22 5/250 2026-03-23 19:37 by pswait
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭