应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1497  |  回复: 14
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1772701

新虫 (初入文坛)
已领完
载体构建
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

我有一个400bp和882bp的片段需要构建过表达载体，但是现在基因一直扩不出来！！感觉要疯了，使用的是酶切位点?cds序列前后20bp的引物，现在梯度也试了，要么是没条带要么就是扩不出目的条带！用的日本晴种子cDNA，两个基因都在根和种子中表达，现在不想扩了根本不知道怎么办了！是我酶切位点找的有问题吗 都是直接网上搜的 引物是去掉了酶切位点后面的保护碱基?20bp 这么一个序列 F和R都是这个方法设计的。希望各位路过的大佬给点意见和建议！！！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2020-05-23 22:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

等你的时候

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基因扩不出，和酶切位点没有关系，应该从模板和扩增上找原因

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2020-05-24 06:59:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

glowinthesky

新虫 (初入文坛)
不想扩了直接找公司合成呗，这么小的片段又不贵。舍不得钱就用gDNA扩了拼起来。gDNA也扩不出，那你得重新学学引物设计了
赞一下 回复此楼
13楼2020-10-14 16:55:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵鑫易

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同上，合成或者公司亚克隆。自己不熟悉的话可能很久才做出来

实在是要自己P，比如以后分子实验做很多的话往下看。
1.先做个阳性对照确定cDNA、反应条件没问题，选一个曾经P出来的基因一起P

2.增大容错率，力所能及的使用最好的酶

3.引物不止看20bp，看具体tm值。也可去NCBI上尝试blast

4.多找几个引物对
赞一下 回复此楼
14楼2020-10-15 19:22:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
herethere2楼
2020-05-23 22:41   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
xg111111楼
2020-05-23 22:58   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
立林2583693楼
2020-05-23 22:42   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
abc8765244086楼
2020-05-23 22:45   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
stupidboy234楼
2020-05-23 22:42   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
SunLapse10楼
2020-05-23 22:53   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
黑不溜秋珍7楼
2020-05-23 22:46   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
秋土豆香8楼
2020-05-23 22:48   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
HK驱魔者5楼
2020-05-23 22:43   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
快乐小磁场9楼
2020-05-23 22:49   回复  
1772701(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭