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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关水稻愈伤组织诱导的问题
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

[交流] 有关水稻愈伤组织诱导的问题

我做  水稻的组织培养  需要诱导出 水稻的愈伤组织  但每次诱导出来的愈伤都比较碎  软软的  正常的比较好的是致密的 小块状    激素加的是2，4-D，琼脂粉浓度是0.8%的。  希望做过类似实验的高手 给些指点  谢谢
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1楼 2009-07-09 09:13:59
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ychen0530

银虫 (初入文坛)
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我也是做水稻组培的，N6培养基诱导愈伤，2，4-D母液浓度1mg/ml,琼脂粉浓度0.8%，诱导温度26
培养基倒平板后我一般在超净台中透水汽2个小时左右，这样在诱导愈伤时培养瓶中不会产生水汽，相对干燥的环境对诱导状态较好的愈伤比较有利。
另外，个人建议应该选取那些干燥，紧实，呈小球状的愈伤进行后续试验，效果会很好
希望这些对LZ有用，忽忽~~~
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2楼2009-07-09 10:53:30
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chg952

金虫 (小有名气)
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1.        水稻种子70％乙醇消毒1min后，用无菌水洗干净。
2.        用含有Tween20（50mL加一滴）『50uL的枪一滴』的次氯酸钠（2.5％）消毒15min，然后用无菌水冲洗5次
3.        重复上一步（不含Tween20）
4.        无菌水稻种子放置在N6D的固体培养基（琼脂糖7.2g/L）,光照培养32度5天。

1.        农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。
2.        用AAM培养基冲洗下来，摇动0.5小时，静置0.5小时
3.        将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min（稍多一点）
4.        用无菌滤纸吸干多余的菌液
5.        转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上（500uL），然后放到2N6-AS固体培养基上（琼脂糖7.2g/L），25度黑暗共培养3天。
6.        种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。（冲洗30min，摇动10min静止10min反复）
7.        种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。（继代一次/周）
8.        愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。（继代一次/周）32度
9.        幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。





10.        农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。
11.        悬浮在AAM培养基中培养至OD值为0.1
12.        将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min，
13.        用无菌滤纸吸干多余的菌液
14.        转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上，然后放到2N6-AS固体培养基上（04％琼脂糖），25度黑暗共培养3天。
15.        种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。
16.        种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。
17.        愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。
18.        幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。
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3楼2009-07-09 11:02:53
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chg952

金虫 (小有名气)
我们实验室做的水稻组培
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4楼2009-07-09 11:03:28
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)
哦  知道了  每次倒完板 我就只在超净里凉一会 就拿到冰箱里 放起来  可能是水汽的缘故   每次看到种子上面都湿乎乎的 下次多晾 一会看看  谢谢大家
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5楼2009-07-09 11:20:28
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)
那不知道   如果愈伤组织 疏松的话 对以后的成苗 有影响吗
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6楼2009-07-09 11:42:57
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zplipeng

金虫 (著名写手)
好详细
学习了、、、
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
7楼2009-07-09 13:50:00
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ychen0530

银虫 (初入文坛)
★
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由愈伤成苗影响因素很多，温度，光照，通风，愈伤状态等对其都有很大影响。尤其是选用的愈伤状态，我们实验室一般都是选用干燥，紧实，呈圆球状的愈伤进行后续试验。根据我们实验室的经验，愈伤在分化培养基上如果能在2周左右时间出现绿点的话一般问题就不大
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8楼2009-07-10 12:53:49
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)
那对 愈伤的大小 有要求吗  在做分化的时候
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9楼2009-07-11 01:03:11
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