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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

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[交流] 有关水稻愈伤组织诱导的问题

我做水稻的组织培养需要诱导出水稻的愈伤组织但每次诱导出来的愈伤都比较碎软软的正常的比较好的是致密的小块状激素加的是2，4-D，琼脂粉浓度是0.8%的。希望做过类似实验的高手给些指点谢谢

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1楼 2009-07-09 09:13:59

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ychen0530

银虫 (初入文坛)

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我也是做水稻组培的，N6培养基诱导愈伤，2，4-D母液浓度1mg/ml,琼脂粉浓度0.8%，诱导温度26
培养基倒平板后我一般在超净台中透水汽2个小时左右，这样在诱导愈伤时培养瓶中不会产生水汽，相对干燥的环境对诱导状态较好的愈伤比较有利。
另外，个人建议应该选取那些干燥，紧实，呈小球状的愈伤进行后续试验，效果会很好
希望这些对LZ有用，忽忽~~~

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2楼2009-07-09 10:53:30

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chg952

金虫 (小有名气)

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1. 水稻种子70％乙醇消毒1min后，用无菌水洗干净。
2. 用含有Tween20（50mL加一滴）『50uL的枪一滴』的次氯酸钠（2.5％）消毒15min，然后用无菌水冲洗5次
3. 重复上一步（不含Tween20）
4. 无菌水稻种子放置在N6D的固体培养基（琼脂糖7.2g/L）,光照培养32度5天。

1. 农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。
2. 用AAM培养基冲洗下来，摇动0.5小时，静置0.5小时
3. 将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min（稍多一点）
4. 用无菌滤纸吸干多余的菌液
5. 转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上（500uL），然后放到2N6-AS固体培养基上（琼脂糖7.2g/L），25度黑暗共培养3天。
6. 种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。（冲洗30min，摇动10min静止10min反复）
7. 种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。（继代一次/周）
8. 愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。（继代一次/周）32度
9. 幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。

10. 农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。
11. 悬浮在AAM培养基中培养至OD值为0.1
12. 将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min，
13. 用无菌滤纸吸干多余的菌液
14. 转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上，然后放到2N6-AS固体培养基上（04％琼脂糖），25度黑暗共培养3天。
15. 种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。
16. 种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。
17. 愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。
18. 幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。