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xuguang09280036新虫 (初入文坛)
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[交流]
有关水稻愈伤组织诱导的问题
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| 我做 水稻的组织培养 需要诱导出 水稻的愈伤组织 但每次诱导出来的愈伤都比较碎 软软的 正常的比较好的是致密的 小块状 激素加的是2，4-D，琼脂粉浓度是0.8%的。 希望做过类似实验的高手 给些指点 谢谢 |
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zplipeng
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7楼2009-07-09 13:50:00
2楼2009-07-09 10:53:30
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1. 水稻种子70％乙醇消毒1min后，用无菌水洗干净。 2. 用含有Tween20（50mL加一滴）『50uL的枪一滴』的次氯酸钠（2.5％）消毒15min，然后用无菌水冲洗5次 3. 重复上一步（不含Tween20） 4. 无菌水稻种子放置在N6D的固体培养基（琼脂糖7.2g/L）,光照培养32度5天。 1. 农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。 2. 用AAM培养基冲洗下来，摇动0.5小时，静置0.5小时 3. 将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min（稍多一点） 4. 用无菌滤纸吸干多余的菌液 5. 转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上（500uL），然后放到2N6-AS固体培养基上（琼脂糖7.2g/L），25度黑暗共培养3天。 6. 种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。（冲洗30min，摇动10min静止10min反复） 7. 种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。（继代一次/周） 8. 愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。（继代一次/周）32度 9. 幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。 10. 农杆菌EHA105在AB固体培养基上划线培养（加抗生素）28度培养3天。 11. 悬浮在AAM培养基中培养至OD值为0.1 12. 将种子悬浮在AAM培养基中，轻幌1.5min， 13. 用无菌滤纸吸干多余的菌液 14. 转移到已经用AAM培养基浸泡过的直径9cm的滤纸上，然后放到2N6-AS固体培养基上（04％琼脂糖），25度黑暗共培养3天。 15. 种子用无菌水冲洗5次，然后用含有500mg/L的羧苄无菌水冲洗掉农杆菌。 16. 种子用滤纸擦干后，放置在含有50mg/L的潮霉素和400mg/L的羧苄的N6D培养基上32度培养2周。 17. 愈伤组织长出后转移到RE-III培养基上。 18. 幼苗长出后转移到HF培养基上诱导生根。  |
3楼2009-07-09 11:02:53
4楼2009-07-09 11:03:28