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EDC/HoBt在水相中催化酰胺反应的诸多疑问! 已有1人参与
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本人最近在做透明质酸(HA)的羧基与胱胺二盐酸盐(CYS)的氨基生成酰胺的反应。结果打核磁发现CYS并没有接上去。想请教一下各位大佬原因! 1)反应溶剂。因为透明质酸只溶于水,通过参考文献,我选择了pH6.8的磷酸盐缓冲液作为反应溶剂。 2)催化体系。因为NHS水溶性不好,所以我用的是EDC.HCl和HoBt(HoBt是溶解到极少量的DMF中加入的). 3)活化时间。我选择了搅拌活化2h后再加入CYS 咨询了一些师兄师姐,但是还是没搞明白,有几个问题要问: 1)pH的调节问题。因为EDC.HCl和CYS都带盐酸,所以加入之后反应体系的pH大概下降到5左右。 有必要通过加入NaOH把pH调回6.8吗? 有人说EDC.HCl的最佳pH在4-6之间。但是,有人又说pH过酸会影响氨基部分的活性。 2)活化时间。 催化形成的活性酯在水溶液中是不是非常不稳定,所以我应该缩短活化时间到15min-30min吗? 3)在查阅文献时发现有人用的EDC.HCl/sulfo-NHS,sulfo-NHS的水溶性比NHS要好些,但是跟HoBt相比,价格实在是有点过高了。 但是从机理上分析HoBt和sulfo-NHS的作用都是相同的。我有必要改用sulfo-NHS吗? 马上就要研三了。疫情耽误了三个月的实验时间。现在材料合成不出来,整个人非常着急,求求有过经验的大家给出一些有用的意见!感激不尽!!@liuanan@liubin |
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