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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qingzi8575

银虫 (正式写手)

[交流] 凝胶阻滞 已有6人参与

做凝胶阻滞实验，蛋白与DNA结合后就阻滞到上样孔内怎么办？用的是6%的native胶.

[ Last edited by amisking on 2009-6-30 at 18:56 ]
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1楼 2009-06-23 14:03:41
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不出孔？配4%的胶试试。
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2楼2009-06-23 16:24:11
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
胶浓度不能再小了。再小就拿不起来了。

留在点样孔里的是复合物，跑不出来没有关系。只要下面的DNA有减小的趋势就可以判定有结合。
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3楼2009-06-23 17:15:20
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
审稿人的意见是，要排除蛋白是不是沉淀聚集在上样孔内。。。这可怎么办
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4楼2009-06-23 17:37:41
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我就用4%的胶。蛋白是93KDA的。
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5楼2009-06-30 10:44:09
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换缓冲体系，TBE,TAE，TGE挨个试一下
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6楼2009-06-30 17:55:11
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海金

新虫 (初入文坛)

遇到相同实验问题 请指点 万分感谢

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
您好，请问现在您的样品跑出胶孔了吗，是怎样跑出来的，实验条件怎样改变后做到的。 现在困在这了，请指点，万分感谢！
祝好!
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7楼2010-12-08 15:46:53
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 海金 at 2010-12-08 15:46:53:
您好，请问现在您的样品跑出胶孔了吗，是怎样跑出来的，实验条件怎样改变后做到的。 现在困在这了，请指点，万分感谢！
祝好!

没有 我的是蛋白加DNA产生了不溶性沉淀 可以将DNA浓度加大 盐离子浓度稍微调高 还有就是缓冲体系 磷酸盐 柠檬酸盐都试一下
还沉淀的话就不能用这个试验了 采用膜结合试验 将蛋白转膜
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8楼2010-12-08 19:25:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
原来现在EMSA还有人用啊…………应该淘汰的技术了
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9楼2010-12-08 20:48:59
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-08 20:48:59:
原来现在EMSA还有人用啊…………应该淘汰的技术了

确实应该淘汰 但是国内用的人还很多
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10楼2010-12-09 09:23:52
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