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clx@6016

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE显示是四聚体,凝胶层析结果表明是二聚体 已有1人参与

近期做一个蛋白,发现非常奇特的现象,请各位懂行的大神给些意见,不胜感激。
这个蛋白的理论分子量大小是37kDa,可是在SDS-PAGE上居然显示为140-150kDa之间,我们推测这是同源四聚体,而且具体的组成形式是非二硫键模式的。
于是我们利用Superdex200进行凝胶阻滞实验,根据标准曲线(柱子自带的标准曲线,我们自己跑了maker也重新做了标准曲线),结果显示其分子量大小在
80kD左右,也就是说是二聚体。
这是一个矛盾的现象,请问大家有什么可以解释的方法或者参考文献吗?
1.80kDa的二聚体蛋白有什么情况,可以让他SDS-PAGE显示比自身分子量大?
2.140kDa的蛋白在什么特殊的情况下,他的凝胶阻滞实验会延后?或者说凝胶阻滞除了分子量还和别的有关吗?
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得是二聚体的可能比较大。一般SDS-PAGE条件下,多聚体都会解离。能不能详细说下你的蛋白有没有做过什么预处理导致交联了?或者结合了核酸?或者自身所带电性很极端?方便的话放上SDS-PAGE图看看。
2楼2016-01-07 14:42:32
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