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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

[求助] EMSA问题

想请教一个EMSA(凝胶阻滞实验)的问题:
我的蛋白是可以与目的DNA binding的,但是有个问题是我的蛋白跑不出加样孔。我怀疑是否是由于我的蛋白形成了多聚体而跑不出加样孔,或者是因为其他的原因?请问是否有人碰到相同的问题,有什么解决的方法?谢谢!
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

2楼2011-05-13 17:39:01
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muzihai

银虫 (正式写手)

我也想做这个,但是之前没做过,过来学习
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
3楼2011-05-13 22:05:37
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lnlygy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-06 17:14:41
zhuifeng7000(金币+3): 有帮助 2012-01-07 14:54:13
zhuifeng7000(金币+1): 有帮助 2012-01-09 20:14:06
你是不是蛋白上样量太高了,在5 ug左右比较好
博士是走过不是路过
4楼2012-01-06 16:36:24
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
: Originally posted by lnlygy at 2012-01-06 16:36:24:
你是不是蛋白上样量太高了,在5 ug左右比较好

这跟蛋白的上样量应该没有太大的关心,我猜测应该是在buffer中我蛋白形成了多聚体,不过还是感谢。
5楼2012-01-07 14:54:22
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuifeng7000: 金币+2, 有帮助, EMSA蛋白不能变性。 2012-04-01 18:02:33
我觉得你是不是蛋白没变性啊
6楼2012-01-31 17:19:48
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


西瓜: 金币+1, Good! 2012-04-23 18:44:34
西瓜: 回帖置顶 2012-04-23 18:44:36
引用回帖:
: Originally posted by bst5 at 2012-01-31 17:19:48:
我觉得你是不是蛋白没变性啊

蛋白变性后就不会与DNA结合了,所以做的时候就是要求蛋白不能变性的。
7楼2012-02-13 09:14:35
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13808906306

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuifeng7000: 金币+2, 有帮助, 有可能。 2012-04-01 18:02:09
我觉得是DNA带负电的原因吧
8楼2012-02-13 13:53:07
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我现在也遇到同样的问题,蛋白滞留加样孔了,请问一下你是怎么改进的?我的QQ329232570,邮箱xinxiyuzhou@126.com.希望你给点建议,不胜感激
9楼2012-04-23 18:22:35
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13808906306

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我更觉得是胶浓度太大了,以至于蛋白跑不下去,可以把胶的浓度调低点,4%左右应该可以
10楼2012-05-11 20:10:37
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