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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

[求助] EMSA问题

想请教一个EMSA（凝胶阻滞实验）的问题：
我的蛋白是可以与目的DNA binding的，但是有个问题是我的蛋白跑不出加样孔。我怀疑是否是由于我的蛋白形成了多聚体而跑不出加样孔，或者是因为其他的原因？请问是否有人碰到相同的问题，有什么解决的方法？谢谢！
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1楼 2011-05-13 10:13:01
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
2楼2011-05-13 17:39:01
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muzihai

银虫 (正式写手)
我也想做这个，但是之前没做过，过来学习
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没有过不去的事情，只有过不去的心情！
3楼2011-05-13 22:05:37
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lnlygy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-06 17:14:41
zhuifeng7000(金币+3): ★有帮助 2012-01-07 14:54:13
zhuifeng7000(金币+1): ★有帮助 2012-01-09 20:14:06
你是不是蛋白上样量太高了，在5 ug左右比较好
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博士是走过不是路过
4楼2012-01-06 16:36:24
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by lnlygy at 2012-01-06 16:36:24:
你是不是蛋白上样量太高了，在5 ug左右比较好

这跟蛋白的上样量应该没有太大的关心，我猜测应该是在buffer中我蛋白形成了多聚体，不过还是感谢。
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5楼2012-01-07 14:54:22
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuifeng7000: 金币+2, ★有帮助, EMSA蛋白不能变性。 2012-04-01 18:02:33
我觉得你是不是蛋白没变性啊
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6楼2012-01-31 17:19:48
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
西瓜: 金币+1, Good！ 2012-04-23 18:44:34
西瓜: 回帖置顶 2012-04-23 18:44:36
引用回帖:
楼: Originally posted by bst5 at 2012-01-31 17:19:48:
我觉得你是不是蛋白没变性啊

蛋白变性后就不会与DNA结合了，所以做的时候就是要求蛋白不能变性的。
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7楼2012-02-13 09:14:35
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13808906306

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuifeng7000: 金币+2, ★有帮助, 有可能。 2012-04-01 18:02:09
我觉得是DNA带负电的原因吧
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8楼2012-02-13 13:53:07
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我现在也遇到同样的问题，蛋白滞留加样孔了，请问一下你是怎么改进的？我的QQ329232570，邮箱xinxiyuzhou@126.com.希望你给点建议，不胜感激
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9楼2012-04-23 18:22:35
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13808906306

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我更觉得是胶浓度太大了，以至于蛋白跑不下去，可以把胶的浓度调低点，4%左右应该可以
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10楼2012-05-11 20:10:37
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