应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 目的基因连入pET-28a中，其前有His6标记，请问怎么纯化？
101/1返回列表
查看: 1037  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 目的基因连入pET-28a中，其前有His6标记，请问怎么纯化？

如题！
目的基因导入pET-28a中，并在大肠杆菌中获得活性表达。在目的基因前含有His6标记。请问：
A.是该采用Ni-柱来纯化吗？
B.买的话，该填料价钱大概多少？
C.哪家公司的比较好？
D.应用Ni-柱纯化目的蛋白麻烦吗？

在此等候各位大侠赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-06-16 20:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):置顶！呵呵 6-17 09:25
顶一下！
2楼2009-06-16 20:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gusubiao

新虫 (初入文坛)
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢 6-17 09:24
His6标记应该用Ni-柱纯化的
我用的进口的大概千把快钱一瓶20ml
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-06-16 21:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smurfen

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):有多快？效果如何？ 6-16 21:23
英骏的his-tag填料用得比较普遍
简单的方法就是不装柱子，在离心管里操作，挺快的呢
赞一下(2人) 回复此楼
Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
4楼2009-06-16 21:15:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chinosaur

木虫 (正式写手)

求购IQ卡
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢，Ni柱纯化一般就可以了吧，还需要再进一步纯化吗？ 6-17 09:21
A:是的，用镍柱纯化
B：不太清楚
C：GE的才应该是使用最广泛的，但可能比其他稍贵一点，但质量过硬
D：非常简单方便，将菌液破碎后，高速离心，将上清流过镍柱，这时你的蛋白就留在柱子上了，流过一次就足够了。如果你不放心，可以将第一次的FLOW THROUGH再流过柱子一次。然后用含5-25mM咪唑的lysis buffer去冲洗柱子两柱，洗掉杂蛋白。然后用蛋白内切酶切掉你的TAG就可以得到比较纯的蛋白了，接着就去进行下一步的纯化。镍柱的清洗用250mM的咪唑去冲洗就可以了。
赞一下(2人) 回复此楼
http://www.99zihua.com/images/20100123/56.gifhttp://hi.baidu.com/chinosaur招行充话费：http://shop.cmbchina.com/shop/chonghuafei.aspx
5楼2009-06-16 22:54:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chinosaur at 2009-6-16 22:54:
然后用蛋白内切酶切掉你的TAG就可以得到比较纯的蛋白了，接着就去进行下一步的纯化。

Ni柱纯化就可以了吧，还需要进一步纯化吗？

[ Last edited by wh7690703 on 2009-6-17 at 09:24 ]
赞一下 回复此楼
6楼2009-06-17 09:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我买的是GE的树脂5ML 570
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-06-17 09:47:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Tags通常不会影响后来蛋白的活性，不需要切除。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-06-17 10:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
我们用的Ni柱层析，很抱歉我不知道价格哈哈
赞一下 回复此楼
9楼2009-06-17 10:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
大包装上千，具体分到每一管有50、60元，我指的是一般的镍柱。
赞一下(1人) 回复此楼
平和悦衲！
10楼2009-06-17 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh7690703 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +7 顾九笙要谦虚 2026-03-24 7/350 2026-03-25 15:18 by baoball
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭