| 查看: 1189 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
wh7690703木虫 (正式写手)
|
[交流]
目的基因连入pET-28a中，其前有His6标记，请问怎么纯化？
|
||
|
如题！ 目的基因导入pET-28a中，并在大肠杆菌中获得活性表达。在目的基因前含有His6标记。请问： A.是该采用Ni-柱来纯化吗？ B.买的话，该填料价钱大概多少？ C.哪家公司的比较好？ D.应用Ni-柱纯化目的蛋白麻烦吗？ 在此等候各位大侠赐教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
haoqian6135
木虫 (正式写手)
蜗牛～
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1764.2
- 帖子: 435
- 在线: 171小时
- 虫号: 733468
- 注册: 2009-03-28
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
10楼2009-06-17 17:14:22
3楼2009-06-16 21:08:58
smurfen
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 20976.6
- 红花: 3
- 帖子: 2644
- 在线: 151.8小时
- 虫号: 340110
- 注册: 2007-04-07
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2009-06-16 21:15:42
chinosaur
木虫 (正式写手)
求购IQ卡
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3126.4
- 散金: 50
- 红花: 3
- 帖子: 717
- 在线: 142.4小时
- 虫号: 257498
- 注册: 2006-06-04
- 性别: GG
- 专业: 计算机软件
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢，Ni柱纯化一般就可以了吧，还需要再进一步纯化吗？ 6-17 09:21
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢，Ni柱纯化一般就可以了吧，还需要再进一步纯化吗？ 6-17 09:21
|
A:是的，用镍柱纯化 B：不太清楚 C：GE的才应该是使用最广泛的，但可能比其他稍贵一点，但质量过硬 D：非常简单方便，将菌液破碎后，高速离心，将上清流过镍柱，这时你的蛋白就留在柱子上了，流过一次就足够了。如果你不放心，可以将第一次的FLOW THROUGH再流过柱子一次。然后用含5-25mM咪唑的lysis buffer去冲洗柱子两柱，洗掉杂蛋白。然后用蛋白内切酶切掉你的TAG就可以得到比较纯的蛋白了，接着就去进行下一步的纯化。镍柱的清洗用250mM的咪唑去冲洗就可以了。 |
5楼2009-06-16 22:54:53
25