| 查看: 1031 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
wh7690703木虫 (正式写手)
|
[交流]
目的基因连入pET-28a中，其前有His6标记，请问怎么纯化？
|
||
|
如题！ 目的基因导入pET-28a中，并在大肠杆菌中获得活性表达。在目的基因前含有His6标记。请问： A.是该采用Ni-柱来纯化吗？ B.买的话，该填料价钱大概多少？ C.哪家公司的比较好？ D.应用Ni-柱纯化目的蛋白麻烦吗？ 在此等候各位大侠赐教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
考研化学308分求调剂
已经有11人回复
-
294求调剂材料与化工专硕
已经有16人回复
-
299求调剂
已经有8人回复
-
一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。
已经有4人回复
-
298求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有10人回复
-
286求调剂
已经有11人回复
-
303求调剂
已经有3人回复
-
0703化学求调剂
已经有7人回复
-
295求调剂
已经有7人回复
chinosaur
木虫 (正式写手)
求购IQ卡
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3126.4
- 散金: 50
- 红花: 3
- 帖子: 717
- 在线: 142.4小时
- 虫号: 257498
- 注册: 2006-06-04
- 性别: GG
- 专业: 计算机软件
★ ★
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢，Ni柱纯化一般就可以了吧，还需要再进一步纯化吗？ 6-17 09:21
wh7690703(金币+1):谢谢参与
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢，Ni柱纯化一般就可以了吧，还需要再进一步纯化吗？ 6-17 09:21
|
A:是的，用镍柱纯化 B：不太清楚 C：GE的才应该是使用最广泛的，但可能比其他稍贵一点，但质量过硬 D：非常简单方便，将菌液破碎后，高速离心，将上清流过镍柱，这时你的蛋白就留在柱子上了，流过一次就足够了。如果你不放心，可以将第一次的FLOW THROUGH再流过柱子一次。然后用含5-25mM咪唑的lysis buffer去冲洗柱子两柱，洗掉杂蛋白。然后用蛋白内切酶切掉你的TAG就可以得到比较纯的蛋白了，接着就去进行下一步的纯化。镍柱的清洗用250mM的咪唑去冲洗就可以了。 |
5楼2009-06-16 22:54:53
3楼2009-06-16 21:08:58
smurfen
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 21002.6
- 红花: 3
- 帖子: 2640
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 340110
- 注册: 2007-04-07
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2009-06-16 21:15:42
wh7690703
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 6312.4
- 散金: 295
- 红花: 2
- 帖子: 512
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 565722
- 注册: 2008-05-29
- 专业: 食品加工技术
6楼2009-06-17 09:22:56
6