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大鹏同学

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问各位老师前辈 我pmp柱前衍生化单糖组成分析，标准糖和混... 已有1人参与

请问各位老师前辈 我pmp柱前衍生化单糖组成分析，标准糖和混标溶液浓度为10mM，取100μL加等体积的0.3M氢氧化钠和0.5M PMP，70℃反应90min，然后冷却加100μL0.3M盐酸中和，加水到1 mL 再用氯仿萃取，取水层过膜跑液相，流动相为磷酸盐和乙腈85:15等度洗脱，但是液相结果很不理想。除了衍生剂就只出来一个峰。是反应操作过程有问题吗？反应时间太长？反应过程是否需要避光？还是色谱柱有要求？用的是ZORBAX SB-C18 4.6*150   是否存在有些单糖不好反应？需要注意哪些细节，请各位前辈不吝赐教，感激不尽！ @cgjlove

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1楼 2019-12-30 02:12:37
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万俟拙凡

新虫 (初入文坛)
刚巧我最近也在做单糖组成，之前是用pH6.0的0.02M磷酸盐（83:17）跑的，样品都跑出来了，混标不太清楚。这次换了调pH6.74再试着跑下标准品。不知道你跑了几种单标只出一个峰

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7楼2020-01-03 16:00:08
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菲菲菲鱼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看原理什么的都没问题，单糖峰应该比PMP的峰小很多，或者你标准品浓度太低，我感觉可能还是测试条件上的问题
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2楼2019-12-30 15:45:16
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大鹏同学

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 菲菲菲鱼 at 2019-12-30 15:45:16
我看原理什么的都没问题，单糖峰应该比PMP的峰小很多，或者你标准品浓度太低，我感觉可能还是测试条件上的问题

我重新换做0.1M的混标做也是同样的结果。是流动相比例要调一下吗

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3楼2019-12-31 12:31:19
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菲菲菲鱼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

流动相中的磷酸盐浓度是多少？pH大概在多少？
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4楼2019-12-31 15:20:48
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