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寥落星晨

木虫 (小有名气)

[交流] 双酶切跑胶后用凝胶回收试剂盒回收效率低

求助各位老师,我最近对质粒双酶切,测定3600bp大小的质粒,提取的质粒浓度为328ng/ul,取10ul进行酶切实验,酶切20ul体系,全部跑胶回收807bp目的片段的时候,用10ul洗脱,浓度却仅有25ng/ul左右,感觉很不正常啊,请问这还能继续进行连接实验吗?有没有好的办法提高回收率啊?麻烦您能不能给我一些意见

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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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寥落星晨: 金币+10 2019-12-14 21:13:28
双酶切回收,回收率一般10%,建议你切个20ug回收

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2楼2019-12-14 20:47:30
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

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寥落星晨: 金币+10 2019-12-14 21:15:38
一般酶切产物回收后浓度只有十几ng/ul,连接时载体按30ng加,基因片段mol数是载体的3-10倍,回收后的基因片段25ng/ul我觉得足够做连接了。
3楼2019-12-14 20:58:28
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寥落星晨

木虫 (小有名气)

谢谢,这要弄缩dna吗?用真空干燥浓缩吗

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4楼2019-12-14 21:14:22
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1772701

新虫 (初入文坛)

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寥落星晨: 金币+10 2019-12-15 07:37:19
如果想要胶回收浓度再高点可以尝试做40ul体系,酶切时间长点(在允许范围内),胶回收浓度普遍较低,25ng/ul的浓度其实还好
5楼2019-12-15 00:53:33
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刘小小香

新虫 (小有名气)


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可以直接做连接,没问题的

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6楼2019-12-19 07:55:11
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Acov

新虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-21 21:24:33
有个办法就是,酶切100ul体系,然后直接试剂盒纯化回收后,再跑胶回收,这样浓度会比较高

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7楼2019-12-19 08:37:55
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