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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR溶解曲线双峰
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)

[求助] PCR溶解曲线双峰 已有1人参与

有一对引物，之前用的一直是好的，溶解曲线单峰，扩增效率也符合要求
但最近不知为什么，突然变成了双峰，且订了新的引物再试也是双峰，扩增效率也很差
试了提高退火温度，没有太大改善，各位虫友有遇到这种情况吗？
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1楼 2019-12-13 14:07:40
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lansong9783

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双峰位置？两次都是同一批cDNA吗，再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

苏拉醒了
2楼2019-12-13 14:18:52
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lansong9783 at 2019-12-13 14:18:52
双峰位置？两次都是同一批cDNA吗，再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染

本来溶解曲线峰值出现在87度，现在在83度左右有了一个峰，cDNA用了之前的也用了新逆转录得到的，但是都没改善。我现在也怀疑是DNA污染，但是为什么我同时做看家基因就没有问题呢。。。
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3楼2019-12-13 14:40:17
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)
有人遇到类似问题吗
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4楼2019-12-13 21:01:16
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xp198903

铜虫 (初入文坛)
可能是RNA浓度过高或者过低逆转录造成的。引物本身也不是很好。试试新贝生物的R202逆转录mix和Q204 qpcr mix可能有惊喜

发自小木虫Android客户端
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5楼2019-12-16 17:31:38
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)
实验室存在一定DNA污染，换了一个专门的房间做PCR，问题解决了。
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6楼2020-01-28 17:45:51
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