应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR溶解曲线双峰
61/1返回列表
查看: 2352  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苏拉醒了

木虫 (小有名气)

[求助] PCR溶解曲线双峰 已有1人参与

有一对引物，之前用的一直是好的，溶解曲线单峰，扩增效率也符合要求
但最近不知为什么，突然变成了双峰，且订了新的引物再试也是双峰，扩增效率也很差
试了提高退火温度，没有太大改善，各位虫友有遇到这种情况吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-12-13 14:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lansong9783

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双峰位置？两次都是同一批cDNA吗，再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

苏拉醒了
2楼2019-12-13 14:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉醒了

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lansong9783 at 2019-12-13 14:18:52
双峰位置？两次都是同一批cDNA吗，再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染

本来溶解曲线峰值出现在87度，现在在83度左右有了一个峰，cDNA用了之前的也用了新逆转录得到的，但是都没改善。我现在也怀疑是DNA污染，但是为什么我同时做看家基因就没有问题呢。。。
赞一下 回复此楼
3楼2019-12-13 14:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉醒了

木虫 (小有名气)
有人遇到类似问题吗
赞一下 回复此楼
4楼2019-12-13 21:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198903

铜虫 (初入文坛)
可能是RNA浓度过高或者过低逆转录造成的。引物本身也不是很好。试试新贝生物的R202逆转录mix和Q204 qpcr mix可能有惊喜

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2019-12-16 17:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉醒了

木虫 (小有名气)
实验室存在一定DNA污染，换了一个专门的房间做PCR，问题解决了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2020-01-28 17:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苏拉醒了 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭