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苏拉醒了

木虫 (小有名气)

[求助] PCR溶解曲线双峰 已有1人参与

有一对引物,之前用的一直是好的,溶解曲线单峰,扩增效率也符合要求
但最近不知为什么,突然变成了双峰,且订了新的引物再试也是双峰,扩增效率也很差
试了提高退火温度,没有太大改善,各位虫友有遇到这种情况吗?
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lansong9783

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
双峰位置?两次都是同一批cDNA吗,再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2019-12-13 14:18:52
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lansong9783 at 2019-12-13 14:18:52
双峰位置?两次都是同一批cDNA吗,再用之前的cDNA试一次。是不是掺入了DNA污染

本来溶解曲线峰值出现在87度,现在在83度左右有了一个峰,cDNA用了之前的也用了新逆转录得到的,但是都没改善。我现在也怀疑是DNA污染,但是为什么我同时做看家基因就没有问题呢。。。
3楼2019-12-13 14:40:17
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)

有人遇到类似问题吗
4楼2019-12-13 21:01:16
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xp198903

铜虫 (初入文坛)

可能是RNA浓度过高或者过低逆转录造成的。引物本身也不是很好。试试新贝生物的R202逆转录mix和Q204 qpcr mix可能有惊喜

发自小木虫Android客户端
5楼2019-12-16 17:31:38
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苏拉醒了

木虫 (小有名气)

实验室存在一定DNA污染,换了一个专门的房间做PCR,问题解决了。
6楼2020-01-28 17:45:51
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