应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收产物连t载体连不上 求教
271/1返回列表
查看: 2613  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xydlengyue

金虫 (正式写手)

[交流] 胶回收产物连t载体连不上 求教

rt  最近用1kb左右产物胶回收连t载体一直连不上
之前胶回收用的酶是塔卡拉的Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0 plus dye) 加的有a  然后t载体用过两种 一种是天根的pgm-t 和全式金的blunt zero cloning kit 都是按照说明书来的  在氨苄的板子上都长很多 但是摇菌pcr一直都是什么结果都没有 心态有点炸了 哪位大佬指导一下啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2019-11-11 21:35:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

木冰衿→_→

新虫 (正式写手)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
提过质粒没有？要不跑个质粒看看？是做的菌液pcr吗？是不是验证pcr出了问题？模板稀释了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2019-11-11 22:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

金刚太郎

新虫 (小有名气)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
是不是压根就没连上没有导进去，板子上长的转化子都是你之前做的大肠感觉感受态染的抗性杂菌？以前我们实验室也出现过这个问题，大家都是多大肠导质粒，各种各项的抗性，结果有次弄混了，也出现了你这样的情况。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2019-11-11 22:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
胶回收购用的是哪家的盒子？产物浓度够吗？有没有抑制剂残留？

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2019-11-12 05:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
1.全式金那个是平末端的吗？我记不得了，好像有点像平的2.长很多可能是你amp过期了吧，试试新amp

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2019-11-12 08:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)
3.你可以切胶回收看看

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2019-11-12 08:56:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
验证的引物用过推荐的通用引物  也用过自己设计的特异性引物 但是都没有结果
赞一下 回复此楼
2楼2019-11-11 21:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名


★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
赞一下
14楼2019-11-12 10:04:19
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 木冰衿→_→ at 2019-11-11 22:13:25
提过质粒没有？要不跑个质粒看看？是做的菌液pcr吗？是不是验证pcr出了问题？模板稀释了吗？

没提质粒 做的菌液pcr 用他给的验证性引物和我自己的特异性引物都没做出来 不知道啥问题 模板就是过夜摇的菌液
赞一下 回复此楼
15楼2019-11-12 11:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 金刚太郎 at 2019-11-11 22:25:07
是不是压根就没连上没有导进去，板子上长的转化子都是你之前做的大肠感觉感受态染的抗性杂菌？以前我们实验室也出现过这个问题，大家都是多大肠导质粒，各种各项的抗性，结果有次弄混了，也出现了你这样的情况。
...

感受态不是制作的 是买t载体送的
赞一下 回复此楼
16楼2019-11-12 11:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by woshishui916 at 2019-11-12 05:32:03
胶回收购用的是哪家的盒子？产物浓度够吗？有没有抑制剂残留？

胶回收试剂盒是omega的 产物浓度一个50 一个100 应该没抑制剂残留吧 我都是按照说明来的
赞一下 回复此楼
17楼2019-11-12 11:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2019-11-12 08:54:54
1.全式金那个是平末端的吗？我记不得了，好像有点像平的2.长很多可能是你amp过期了吧，试试新amp

是平末端的  他t载体说的是连上的才能生长 连不上的没法生长 都是验证全都不对...
赞一下 回复此楼
18楼2019-11-12 11:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by HLYY at 2019-11-12 10:04:19
全式金的blunt zero cloning kit 是平端连接试剂盒，当载体与片段连接不成功时，自杀基因正确表达，包含载体的细胞无法生长。天根的试剂盒也连接不上，要考虑是否是胶回收浓度太低或者是载体和片段的摩尔比不正确。

胶回收浓度50和100  片段摩尔比开始按照1比7  然后跑了几次跑不出来 就多加了模板  还是跑不出来
赞一下 回复此楼
19楼2019-11-12 11:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名


本帖仅楼主可见
赞一下
20楼2019-11-12 14:37:50
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

木冰衿→_→

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xydlengyue at 2019-11-12 11:53:03
没提质粒 做的菌液pcr 用他给的验证性引物和我自己的特异性引物都没做出来 不知道啥问题 模板就是过夜摇的菌液...

如果其他没问题的话，也很有可能是菌液pcr的问题，菌液pcr操作不好经常做不出来的。记得要模板要稀释10到100倍，最好煮沸5分钟。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
22楼2019-11-12 23:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lqbzfun

铜虫 (初入文坛)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
回收前，别紫外下拍照，直接切胶，速度快点。如有可能，蓝光切胶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
23楼2019-11-13 14:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by lqbzfun at 2019-11-13 14:34:48
回收前，别紫外下拍照，直接切胶，速度快点。如有可能，蓝光切胶

请问这个照多久算久呢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
24楼2019-11-13 21:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew3楼
2019-11-11 21:49   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
solarzhao4楼
2019-11-11 22:00   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
xiaoshuang16楼
2019-11-11 22:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
syhorchid8楼
2019-11-11 22:47   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
hikingman9楼
2019-11-12 00:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
xiaoqiuqiu2010楼
2019-11-12 00:34   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
psylhh21楼
2019-11-12 22:42   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
miaojiabing25楼
2019-11-14 08:29   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
nono200926楼
2021-10-03 13:37   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
·
刀劈三关27楼
2021-10-04 21:52   回复  
。
相关版块跳转 我要订阅楼主 xydlengyue 的主题更新
271/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭