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xydlengyue

金虫 (正式写手)


[交流] 胶回收产物连t载体连不上 求教

rt  最近用1kb左右产物胶回收连t载体一直连不上
之前胶回收用的酶是塔卡拉的Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0 plus dye) 加的有a  然后t载体用过两种 一种是天根的pgm-t 和全式金的blunt zero cloning kit 都是按照说明书来的  在氨苄的板子上都长很多 但是摇菌pcr一直都是什么结果都没有 心态有点炸了 哪位大佬指导一下啊
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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)



xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
提过质粒没有?要不跑个质粒看看?是做的菌液pcr吗?是不是验证pcr出了问题?模板稀释了吗?

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5楼2019-11-11 22:13:25
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xydlengyue

金虫 (正式写手)


验证的引物用过推荐的通用引物  也用过自己设计的特异性引物 但是都没有结果
2楼2019-11-11 21:37:20
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金刚太郎

新虫 (小有名气)



xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
是不是压根就没连上没有导进去,板子上长的转化子都是你之前做的大肠感觉感受态染的抗性杂菌?以前我们实验室也出现过这个问题,大家都是多大肠导质粒,各种各项的抗性,结果有次弄混了,也出现了你这样的情况。

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7楼2019-11-11 22:25:07
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woshishui916

木虫 (著名写手)



xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
胶回收购用的是哪家的盒子?产物浓度够吗?有没有抑制剂残留?

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11楼2019-11-12 05:32:03
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solarzhao4楼
2019-11-11 22:00   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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2019-11-11 22:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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hikingman9楼
2019-11-12 00:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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