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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收产物连t载体连不上 求教
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xydlengyue

金虫 (正式写手)

[交流] 胶回收产物连t载体连不上 求教

rt  最近用1kb左右产物胶回收连t载体一直连不上
之前胶回收用的酶是塔卡拉的Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0 plus dye) 加的有a  然后t载体用过两种 一种是天根的pgm-t 和全式金的blunt zero cloning kit 都是按照说明书来的  在氨苄的板子上都长很多 但是摇菌pcr一直都是什么结果都没有 心态有点炸了 哪位大佬指导一下啊
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1楼 2019-11-11 21:35:07
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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xydlengyue at 2019-11-12 11:53:03
没提质粒 做的菌液pcr 用他给的验证性引物和我自己的特异性引物都没做出来 不知道啥问题 模板就是过夜摇的菌液...

如果其他没问题的话，也很有可能是菌液pcr的问题，菌液pcr操作不好经常做不出来的。记得要模板要稀释10到100倍，最好煮沸5分钟。

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22楼2019-11-12 23:39:35
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xydlengyue

金虫 (正式写手)
验证的引物用过推荐的通用引物  也用过自己设计的特异性引物 但是都没有结果
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2楼2019-11-11 21:37:20
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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
提过质粒没有？要不跑个质粒看看？是做的菌液pcr吗？是不是验证pcr出了问题？模板稀释了吗？

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5楼2019-11-11 22:13:25
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金刚太郎

新虫 (小有名气)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
是不是压根就没连上没有导进去，板子上长的转化子都是你之前做的大肠感觉感受态染的抗性杂菌？以前我们实验室也出现过这个问题，大家都是多大肠导质粒，各种各项的抗性，结果有次弄混了，也出现了你这样的情况。

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7楼2019-11-11 22:25:07
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solarzhao4楼
2019-11-11 22:00   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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xiaoshuang16楼
2019-11-11 22:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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hikingman9楼
2019-11-12 00:21   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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