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胶回收产物连t载体连不上 求教
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xydlengyue
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虫号: 6970639
[交流]
胶回收产物连t载体连不上 求教
rt 最近用1kb左右产物胶回收连t载体一直连不上
之前胶回收用的酶是塔卡拉的Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0 plus dye) 加的有a 然后t载体用过两种 一种是天根的pgm-t 和全式金的blunt zero cloning kit 都是按照说明书来的 在氨苄的板子上都长很多 但是摇菌pcr一直都是什么结果都没有 心态有点炸了 哪位大佬指导一下啊
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1楼
2019-11-11 21:35:07
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xydlengyue
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14楼
:
Originally posted by
HLYY
at 2019-11-12 10:04:19
全式金的blunt zero cloning kit 是平端连接试剂盒，当载体与片段连接不成功时，自杀基因正确表达，包含载体的细胞无法生长。天根的试剂盒也连接不上，要考虑是否是胶回收浓度太低或者是载体和片段的摩尔比不正确。
胶回收浓度50和100 片段摩尔比开始按照1比7 然后跑了几次跑不出来 就多加了模板 还是跑不出来
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19楼
2019-11-12 11:58:12
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xydlengyue
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虫号: 6970639
验证的引物用过推荐的通用引物 也用过自己设计的特异性引物 但是都没有结果
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2楼
2019-11-11 21:37:20
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木冰衿→_→
新虫
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★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
提过质粒没有？要不跑个质粒看看？是做的菌液pcr吗？是不是验证pcr出了问题？模板稀释了吗？
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5楼
2019-11-11 22:13:25
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金刚太郎
新虫
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虫号: 4163340
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
是不是压根就没连上没有导进去，板子上长的转化子都是你之前做的大肠感觉感受态染的抗性杂菌？以前我们实验室也出现过这个问题，大家都是多大肠导质粒，各种各项的抗性，结果有次弄混了，也出现了你这样的情况。
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7楼
2019-11-11 22:25:07
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solarzhao
4楼
2019-11-11 22:00
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xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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xiaoshuang1
6楼
2019-11-11 22:21
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xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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hikingman
9楼
2019-11-12 00:21
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xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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