应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 乳酸菌电转后不长是什么原因？
51/1返回列表
查看: 1716  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

KM石头

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸菌电转后不长是什么原因？ 已有1人参与

感受态制备：向感受态制备培养基（2%甘氨酸+MRS培养基）中，按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养，OD600达到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌体；用10ml预冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重悬，5000g 10min收集菌体（该步骤重复两次），使用电击缓冲液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）两次，添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体，分装成100μl每管。
电转：向感受态细胞中加入1μg待转质粒，转移到电击杯中，电击条件:2000V 200Ω 25μF，电转完成后冰浴10min，加入无抗感受态复苏培养基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基），28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清，重悬菌体，涂布于抗性平板（红霉素2μg/ml）上，28℃倒置培养。
载体为温敏型质粒，28℃下稳定复制。
请各位大佬分析一下可能有什么原因
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-10-28 09:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，为分子生物板块发展助力。 2019-10-29 13:27:22
蔗糖质量不够好

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-10-28 10:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-28 10:50:16
蔗糖质量不够好

蔗糖有什么要求吗？
我用的是北京化工的分析纯蔗糖
赞一下 回复此楼
3楼2019-10-28 11:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
我一般最低用sigma的，400元每100g的，国产的我连配培养基都不用

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-10-28 14:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王超福瑞达

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了没？我现在在做乳酸菌的电击转化，想咨询一下
赞一下 回复此楼
5楼2020-03-31 16:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 KM石头 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 工科0856求调剂 +4 沐析汀汀 2026-03-21 4/200 2026-03-23 13:08 by 醉在风里
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭