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KM石头

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸菌电转后不长是什么原因?已有1人参与

感受态制备:向感受态制备培养基(2%甘氨酸+MRS培养基)中,按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养,OD600达到0.4-0.6,冰浴30min,5000g 10min收集菌体;用10ml预冷washing buffer(0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2)重悬,5000g 10min收集菌体(该步骤重复两次),使用电击缓冲液清洗(0.3M蔗糖+10%甘油)两次,添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体,分装成100μl每管。
电转:向感受态细胞中加入1μg待转质粒,转移到电击杯中,电击条件:2000V 200Ω 25μF,电转完成后冰浴10min,加入无抗感受态复苏培养基(20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基),28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清,重悬菌体,涂布于抗性平板(红霉素2μg/ml)上,28℃倒置培养。
载体为温敏型质粒,28℃下稳定复制。
请各位大佬分析一下可能有什么原因
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)



myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流,为分子生物板块发展助力。 2019-10-29 13:27:22
蔗糖质量不够好

发自小木虫Android客户端
2楼2019-10-28 10:50:16
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KM石头

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-28 10:50:16
蔗糖质量不够好

蔗糖有什么要求吗?
我用的是北京化工的分析纯蔗糖
3楼2019-10-28 11:37:12
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)



myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
我一般最低用sigma的,400元每100g的,国产的我连配培养基都不用

发自小木虫Android客户端
4楼2019-10-28 14:36:59
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王超福瑞达

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了没?我现在在做乳酸菌的电击转化,想咨询一下
5楼2020-03-31 16:16:09
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