| 查看: 1622 | 回复: 4 | ||
[求助]
乳酸菌电转后不长是什么原因？已有1人参与
|
|
感受态制备：向感受态制备培养基（2%甘氨酸+MRS培养基）中，按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养，OD600达到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌体；用10ml预冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重悬，5000g 10min收集菌体（该步骤重复两次），使用电击缓冲液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）两次，添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体，分装成100μl每管。 电转：向感受态细胞中加入1μg待转质粒，转移到电击杯中，电击条件:2000V 200Ω 25μF，电转完成后冰浴10min，加入无抗感受态复苏培养基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基），28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清，重悬菌体，涂布于抗性平板（红霉素2μg/ml）上，28℃倒置培养。 载体为温敏型质粒，28℃下稳定复制。 请各位大佬分析一下可能有什么原因 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有257人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
2楼2019-10-28 10:50:16
3楼2019-10-28 11:37:12
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
|
我一般最低用sigma的，400元每100g的，国产的我连配培养基都不用 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-10-28 14:36:59
5楼2020-03-31 16:16:09