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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 乳酸菌电转后不长是什么原因？
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KM石头

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸菌电转后不长是什么原因？ 已有1人参与

感受态制备：向感受态制备培养基（2%甘氨酸+MRS培养基）中，按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养，OD600达到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌体；用10ml预冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重悬，5000g 10min收集菌体（该步骤重复两次），使用电击缓冲液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）两次，添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体，分装成100μl每管。
电转：向感受态细胞中加入1μg待转质粒，转移到电击杯中，电击条件:2000V 200Ω 25μF，电转完成后冰浴10min，加入无抗感受态复苏培养基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基），28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清，重悬菌体，涂布于抗性平板（红霉素2μg/ml）上，28℃倒置培养。
载体为温敏型质粒，28℃下稳定复制。
请各位大佬分析一下可能有什么原因
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1楼 2019-10-28 09:10:51
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，为分子生物板块发展助力。 2019-10-29 13:27:22
蔗糖质量不够好

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2楼2019-10-28 10:50:16
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KM石头

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-28 10:50:16
蔗糖质量不够好

蔗糖有什么要求吗？
我用的是北京化工的分析纯蔗糖
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3楼2019-10-28 11:37:12
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
我一般最低用sigma的，400元每100g的，国产的我连配培养基都不用

发自小木虫Android客户端
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4楼2019-10-28 14:36:59
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王超福瑞达

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了没？我现在在做乳酸菌的电击转化，想咨询一下
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5楼2020-03-31 16:16:09
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