应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 乳酸菌电转后不长是什么原因？
51/1返回列表
查看: 1703  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

KM石头

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸菌电转后不长是什么原因？ 已有1人参与

感受态制备：向感受态制备培养基（2%甘氨酸+MRS培养基）中，按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养，OD600达到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌体；用10ml预冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重悬，5000g 10min收集菌体（该步骤重复两次），使用电击缓冲液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）两次，添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体，分装成100μl每管。
电转：向感受态细胞中加入1μg待转质粒，转移到电击杯中，电击条件:2000V 200Ω 25μF，电转完成后冰浴10min，加入无抗感受态复苏培养基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基），28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清，重悬菌体，涂布于抗性平板（红霉素2μg/ml）上，28℃倒置培养。
载体为温敏型质粒，28℃下稳定复制。
请各位大佬分析一下可能有什么原因
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-10-28 09:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，为分子生物板块发展助力。 2019-10-29 13:27:22
蔗糖质量不够好

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-10-28 10:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-28 10:50:16
蔗糖质量不够好

蔗糖有什么要求吗？
我用的是北京化工的分析纯蔗糖
赞一下 回复此楼
3楼2019-10-28 11:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
我一般最低用sigma的，400元每100g的，国产的我连配培养基都不用

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-10-28 14:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王超福瑞达

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了没？我现在在做乳酸菌的电击转化，想咨询一下
赞一下 回复此楼
5楼2020-03-31 16:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 KM石头 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 298 +8 小西笑嘻嘻 2026-03-03 8/400 2026-03-04 02:50 by 无懈可击111
[考研] 0703化学 学硕 理工科均可 不区分研究方向 总分279求调剂 +5 1一11 2026-03-03 5/250 2026-03-03 23:14 by zhukairuo
[考研] 0703 总分319求调剂 +4 Xinyuu 2026-03-02 4/200 2026-03-03 22:58 by 让我们一起快乐
[考研] 化工专硕调剂 +4 利好利好. 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:30 by L135790
[考研] 理学，工学，农学调剂，少走弯路，这里欢迎您！ +8 likeihood 2026-03-02 11/550 2026-03-03 19:39 by 一叶凡尘?
[考研] 278求调剂 +3 满天星11_22 2026-03-02 3/150 2026-03-03 13:51 by Iveryant
[考研] 291求调剂 +3 MuoLuo1312 2026-03-02 6/300 2026-03-03 12:13 by 热情沙漠
[考研] 调剂 +5 13853210211 2026-03-02 7/350 2026-03-03 11:42 by 13853210211
[考研] 324求调剂 +4 wxz2 2026-03-03 5/250 2026-03-03 09:25 by 杨杨杨紫
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +8 llx0610 2026-03-02 9/450 2026-03-02 22:09 by 无际的草原
[考研] 材料复试调剂 +5 学材料的点 2026-03-01 6/300 2026-03-02 20:01 by hypershenger
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 295求调剂 +8 19171856320 2026-02-28 8/400 2026-03-02 11:19 by yuchj
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 284求调剂 +10 天下熯 2026-02-28 11/550 2026-03-02 11:03 by 无际的草原
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭