应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 乳酸菌电转后不长是什么原因？
51/1返回列表
查看: 1701  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

KM石头

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸菌电转后不长是什么原因？ 已有1人参与

感受态制备：向感受态制备培养基（2%甘氨酸+MRS培养基）中，按5%接种量加入过夜培养的保加利亚乳杆菌菌液。37℃静置培养，OD600达到0.4-0.6，冰浴30min，5000g 10min收集菌体；用10ml预冷washing buffer（0.3M蔗糖+5mM KH2PO4+2mM MgCl2）重悬，5000g 10min收集菌体（该步骤重复两次），使用电击缓冲液清洗（0.3M蔗糖+10%甘油）两次，添加菌液原体积1%w电击缓冲液重悬菌体，分装成100μl每管。
电转：向感受态细胞中加入1μg待转质粒，转移到电击杯中，电击条件:2000V 200Ω 25μF，电转完成后冰浴10min，加入无抗感受态复苏培养基（20mM MgCl2+2mM CaCl2+0.3M蔗糖+MRS培养基），28℃复苏 4h。8000g离心弃去大部分上清，重悬菌体，涂布于抗性平板（红霉素2μg/ml）上，28℃倒置培养。
载体为温敏型质粒，28℃下稳定复制。
请各位大佬分析一下可能有什么原因
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-10-28 09:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，为分子生物板块发展助力。 2019-10-29 13:27:22
蔗糖质量不够好

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-10-28 10:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-28 10:50:16
蔗糖质量不够好

蔗糖有什么要求吗？
我用的是北京化工的分析纯蔗糖
赞一下 回复此楼
3楼2019-10-28 11:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-10-29 13:28:47
我一般最低用sigma的，400元每100g的，国产的我连配培养基都不用

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-10-28 14:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王超福瑞达

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了没？我现在在做乳酸菌的电击转化，想咨询一下
赞一下 回复此楼
5楼2020-03-31 16:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 KM石头 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 学硕材料275调剂 +4 路三三 2026-03-03 4/200 2026-03-03 22:58 by lbsjt
[考研] 中国林科院林化所（南京）2026年招收化学/材料/环境工程等背景硕士研究生3名 +3 realstar2006 2026-02-27 3/150 2026-03-03 21:39 by AC.
[考研] 298求调剂一志愿中海洋 +3 lour. 2026-03-03 3/150 2026-03-03 20:41 by gxg2025
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +5 Qwertyuop 2026-03-01 5/250 2026-03-03 17:50 by 梅子鸭鸭
[考研] 292求调剂 +3 sgbl 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:30 by barlinike
[考研] 289求调剂 +7 BrightLL 2026-03-02 9/450 2026-03-03 16:02 by tgxtgxtgx9
[考研] 材料工程269求调剂 +5 白刺玫 2026-03-02 5/250 2026-03-03 15:59 by tgxtgxtgx9
[考博] 26申博 +4 north， 2026-02-28 4/200 2026-03-03 10:12 by LOYUBUAA
[考研] 298求调剂 +7 axyz3 2026-02-28 8/400 2026-03-03 06:11 by tgxtgxtgx9
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 7/350 2026-03-02 23:02 by 2103240126
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +9 吃宵夜1 2026-02-28 11/550 2026-03-02 20:14 by hypershenger
[考研] 材料复试调剂 +5 学材料的点 2026-03-01 6/300 2026-03-02 20:01 by hypershenger
[考研] 261求调剂 +3 陆lh 2026-03-01 3/150 2026-03-02 19:32 by zhukairuo
[考研] 275求调剂 +7 明远求学 2026-03-01 7/350 2026-03-02 19:22 by zhukairuo
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328，求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 281求调剂 +5 2026计算机_诚心 2026-03-01 8/400 2026-03-02 11:05 by 汪！？！
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭