24小时热门版块排行榜    

查看: 2734  |  回复: 10

炸鱼条yy

新虫 (初入文坛)

[求助] RCA滚环扩增中用到的酶的问题 已有1人参与

我看到都是用phi29这种酶来做滚还扩增,用KF聚合酶可以做吗,以及这两种酶之间有什么区别?有做过的前辈可以分享一下吗。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Tiriosh

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
除了一般的DNA聚合外,RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”,也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息,KF是Moderate strand displacement activity,感觉应该可以做RCA但是可能效率会有影响。与之相对,phi29是strong strand displacement activity。

做RCA用的酶,除了strand displacement性能之外还会考虑exonuclease activity性能,是否具备这一性能对于RCA的实验细节有影响。KF不具备外切酶活性(以NEB官网说明为准,来源不同话可能性能有所不同)那么对primer的处理就需要保证其3'端是结核在circular tempalte上,通常的做法是用外切酶trim一下,这也要看你的实验设计咯。

此外,phi29的一个很大的问题是其最适温度是30°,所以反应速度会慢一些。如果你是处于提高反应温度考虑而换酶的话,推荐你使用EquiPhi29,是phi29的热稳定版。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2019-10-08 20:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tiriosh

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by SX花开有声 at 2019-10-09 09:08:34
想问一下vent聚合酶可以吗...

最早一篇primer generation RCA (08年发表于NAR)用的就是vent

发自小木虫Android客户端
4楼2019-10-09 14:53:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

SX花开有声

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiriosh at 2019-10-08 13:48:04
除了一般的DNA聚合外,RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”,也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息,KF是Moderate strand displacement activity,感觉应该可以做RCA但是 ...

想问一下vent聚合酶可以吗
3楼2019-10-09 09:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

炸鱼条yy

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiriosh at 2019-10-08 20:48:04
除了一般的DNA聚合外,RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”,也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息,KF是Moderate strand displacement activity,感觉应该可以做RCA但是 ...

谢谢您
5楼2019-10-11 14:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13504927475

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by SX花开有声 at 2019-10-09 09:08:34
想问一下vent聚合酶可以吗...

同问 ,Vent酶可以做超分支滚环扩增吗
6楼2019-12-10 21:53:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

历历文

新虫 (初入文坛)

请问,RCA产物跑0.5%的琼脂糖,都留在孔道中,还有长长的拖尾,这是为什么

发自小木虫Android客户端
7楼2020-10-12 20:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

光未暗

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiriosh at 2019-10-08 20:48:04
除了一般的DNA聚合外,RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”,也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息,KF是Moderate strand displacement activity,感觉应该可以做RCA但是 ...

你好 我的滚环扩增一直扩不出来 可以跟你交流一下吗

发自小木虫IOS客户端
8楼2023-10-06 10:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

光未暗

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 历历文 at 2020-10-12 20:12:27
请问,RCA产物跑0.5%的琼脂糖,都留在孔道中,还有长长的拖尾,这是为什么

你好 我的滚环扩增一直扩不出来 可以跟你交流一下吗

发自小木虫IOS客户端
9楼2023-10-06 10:44:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

光未暗

新虫 (初入文坛)

你好 我的滚环扩增一直扩不出来 可以跟你交流一下吗

发自小木虫IOS客户端
10楼2023-10-06 10:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 炸鱼条yy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +7 ounce. 2026-03-04 8/400 2026-03-06 10:27 by pies112
[考研] 材料专硕调剂 +4 慕辰123 2026-03-05 7/350 2026-03-06 10:22 by 慕辰123
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂,有科研和获奖经历 +11 wsxw 2026-03-02 12/600 2026-03-05 09:49 by oxidpl
[考研] 267调剂求助 +5 聪少OZ 2026-03-04 5/250 2026-03-05 09:38 by kakakapanpan
[考研] 一志愿西交化工专硕288专业课93求调剂 +6 好运好运接接 2026-03-04 6/300 2026-03-05 09:36 by houyaoxu
[考研] 0856材料专硕274能调剂去哪里? +3 22735 2026-03-04 4/200 2026-03-05 09:06 by 斩魂滴兔子!
[考研] 材料与化工,291分,求调剂 +9 咕噜咕噜123123 2026-03-04 11/550 2026-03-05 09:03 by 斩魂滴兔子!
[考研] 266求调剂 +7 哇塞王帅 2026-03-03 7/350 2026-03-04 20:30 by 一切OK
[考研] 成绩276,专业代码0856求调剂 +10 小陈朵 2026-03-03 10/500 2026-03-04 20:16 by 1124861332
[考研] 学硕材料275调剂 +9 路三三 2026-03-03 9/450 2026-03-04 17:02 by 梦天888
[考研] 0854总分272 +5 打小就是老实人 2026-03-02 6/300 2026-03-04 01:41 by ouhaiyu
[考研] 298求调剂 +3 人间唯你是清欢 2026-03-03 4/200 2026-03-03 18:09 by ms629
[考研] 266材料化工求调剂 +3 哇塞王帅 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:58 by houyaoxu
[考研] 化工270求调剂 +10 什么名字qwq 2026-03-02 10/500 2026-03-03 13:54 by NUAAZXWS
[考研] 298求调剂 +10 人间唯你是清欢 2026-02-28 14/700 2026-03-02 22:49 by 人间唯你是清欢
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕,总分295分 +8 yl1 2026-03-02 9/450 2026-03-02 21:21 by sunny81
[考研] 0856材料调剂 +5 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:31 by hypershenger
[考研] 材料工程274求调剂 +5 Lilithan 2026-03-01 5/250 2026-03-02 19:39 by caszguilin
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
信息提示
请填处理意见