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RCA滚环扩增中用到的酶的问题 已有1人参与
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| 我看到都是用phi29这种酶来做滚还扩增，用KF聚合酶可以做吗，以及这两种酶之间有什么区别？有做过的前辈可以分享一下吗。 |
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送红花一朵 5楼2019-10-11 14:50:32
Tiriosh
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”，也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息，KF是Moderate strand displacement activity，感觉应该可以做RCA但是可能效率会有影响。与之相对，phi29是strong strand displacement activity。 做RCA用的酶，除了strand displacement性能之外还会考虑exonuclease activity性能，是否具备这一性能对于RCA的实验细节有影响。KF不具备外切酶活性（以NEB官网说明为准，来源不同话可能性能有所不同）那么对primer的处理就需要保证其3'端是结核在circular tempalte上，通常的做法是用外切酶trim一下，这也要看你的实验设计咯。 此外，phi29的一个很大的问题是其最适温度是30°，所以反应速度会慢一些。如果你是处于提高反应温度考虑而换酶的话，推荐你使用EquiPhi29，是phi29的热稳定版。 |
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2楼2019-10-08 20:48:04
3楼2019-10-09 09:08:34
Tiriosh
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4楼2019-10-09 14:53:14
