| 查看: 2820 | 回复: 10 | ||
[求助]
RCA滚环扩增中用到的酶的问题 已有1人参与
|
||
| 我看到都是用phi29这种酶来做滚还扩增，用KF聚合酶可以做吗，以及这两种酶之间有什么区别？有做过的前辈可以分享一下吗。 |
回复此楼» 猜你喜欢
0703调剂，一志愿天津大学319分
已经有18人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有10人回复
-
334分机械专硕求调剂
已经有3人回复
-
本科郑州大学，一志愿华东师范大学282求调剂
已经有16人回复
-
305分求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京化工085600 310分求调剂
已经有21人回复
-
化工学硕 285求调剂
已经有15人回复
-
328求调剂
已经有5人回复
-
材料调剂
已经有9人回复
-
081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校
已经有18人回复
Tiriosh
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 20347.3
- 散金: 3123
- 红花: 66
- 帖子: 3674
- 在线: 5881.7小时
- 虫号: 2417244
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”，也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息，KF是Moderate strand displacement activity，感觉应该可以做RCA但是可能效率会有影响。与之相对，phi29是strong strand displacement activity。 做RCA用的酶，除了strand displacement性能之外还会考虑exonuclease activity性能，是否具备这一性能对于RCA的实验细节有影响。KF不具备外切酶活性（以NEB官网说明为准，来源不同话可能性能有所不同）那么对primer的处理就需要保证其3'端是结核在circular tempalte上，通常的做法是用外切酶trim一下，这也要看你的实验设计咯。 此外，phi29的一个很大的问题是其最适温度是30°，所以反应速度会慢一些。如果你是处于提高反应温度考虑而换酶的话，推荐你使用EquiPhi29，是phi29的热稳定版。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
炸鱼条yy2楼2019-10-08 20:48:04
Tiriosh
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 20347.3
- 散金: 3123
- 红花: 66
- 帖子: 3674
- 在线: 5881.7小时
- 虫号: 2417244
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
4楼2019-10-09 14:53:14
3楼2019-10-09 09:08:34
5楼2019-10-11 14:50:32
6楼2019-12-10 21:53:37
7楼2020-10-12 20:12:27
8楼2023-10-06 10:44:40
9楼2023-10-06 10:44:52
10楼2023-10-06 10:45:15
