应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » RCA滚环扩增中用到的酶的问题
51/1返回列表
查看: 2747  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

炸鱼条yy

新虫 (初入文坛)

[求助] RCA滚环扩增中用到的酶的问题 已有1人参与

我看到都是用phi29这种酶来做滚还扩增，用KF聚合酶可以做吗，以及这两种酶之间有什么区别？有做过的前辈可以分享一下吗。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-10-08 16:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13504927475

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SX花开有声 at 2019-10-09 09:08:34
想问一下vent聚合酶可以吗...

同问 ，Vent酶可以做超分支滚环扩增吗
赞一下 回复此楼
6楼2019-12-10 21:53:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

Tiriosh

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”，也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息，KF是Moderate strand displacement activity，感觉应该可以做RCA但是可能效率会有影响。与之相对，phi29是strong strand displacement activity。

做RCA用的酶，除了strand displacement性能之外还会考虑exonuclease activity性能，是否具备这一性能对于RCA的实验细节有影响。KF不具备外切酶活性（以NEB官网说明为准，来源不同话可能性能有所不同）那么对primer的处理就需要保证其3'端是结核在circular tempalte上，通常的做法是用外切酶trim一下，这也要看你的实验设计咯。

此外，phi29的一个很大的问题是其最适温度是30°，所以反应速度会慢一些。如果你是处于提高反应温度考虑而换酶的话，推荐你使用EquiPhi29，是phi29的热稳定版。
赞一下(6人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

炸鱼条yy
2楼2019-10-08 20:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SX花开有声

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiriosh at 2019-10-08 13:48:04
除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”，也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息，KF是Moderate strand displacement activity，感觉应该可以做RCA但是 ...

想问一下vent聚合酶可以吗
赞一下 回复此楼
3楼2019-10-09 09:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tiriosh

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SX花开有声 at 2019-10-09 09:08:34
想问一下vent聚合酶可以吗...

最早一篇primer generation RCA (08年发表于NAR)用的就是vent

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2019-10-09 14:53:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 新疆大学地质与矿业工程学院招生 +13 another12 2026-03-04 19/950 2026-03-07 21:28 by 13102137290
[考研] 070300化学求调剂292分 +3 打烊eee 2026-03-07 3/150 2026-03-07 20:04 by houyaoxu
[考研] 289求调剂 +10 yang婷 2026-03-02 12/600 2026-03-07 17:34 by 一头开心的哥斯�
[考研] 274求调剂 +7 cgyzqwn 2026-03-01 14/700 2026-03-07 14:51 by Miko19
[考研] 物理学求调剂 +3 sx宋 2026-03-05 3/150 2026-03-07 14:38 by lishahe
[考研] 276求调剂 本科天津工业大学 一志愿北京化工大学0855 +4 路lyh123 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:37 by shdliugang
[考研] 求调剂 一志愿苏州大学，0856化工323分 | 本科应化 | 有专利/竞赛/科研助手经历 | +5 橙子cyx 2026-03-06 6/300 2026-03-06 23:13 by L135790
[考研] 273求调剂 +5 星星111222 2026-03-02 7/350 2026-03-06 20:17 by 星星111222
[考研] 材料277分求调剂 +13 饭饭星球 2026-03-04 14/700 2026-03-06 16:10 by @飒飒飒飒
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-06 4/200 2026-03-06 15:51 by 聪明的大松鼠
[考研] 材料与化工354调剂 +4 Lucy-xiao 2026-03-06 7/350 2026-03-06 09:57 by hxuq8429
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +4 chen_2024 2026-03-02 4/200 2026-03-05 22:59 by sicilyl0001
[考研] 【求调剂】293分环境工程求调剂材料/化工，服从调剂，抗压能力强！ +8 xiiiia 2026-03-04 8/400 2026-03-05 20:01 by wangjihu
[考研] 271求调剂 +7 月色c 2026-03-05 8/400 2026-03-05 19:51 by wangjihu
[考研] 纺织、生物、化学、材料等专业 +3 Eember. 2026-03-05 7/350 2026-03-05 16:35 by Eember.
[考研] 347求调剂 +6 啊欧欧欧 2026-03-03 8/400 2026-03-05 11:40 by 0202liuyan
[考研] 一志愿985材料与化工 326分求调剂 +3 Hz795795 2026-03-04 3/150 2026-03-04 20:54 by wutongshun
[考研] 306求调剂 +7 张张张张oo 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:35 by L135790
[考研] 0856材料工程，初试313调剂 +7 卖个关子吧 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:33 by L135790
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭