| 查看: 1910 | 回复: 10 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者炸鱼条yy将赠送您 10 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
RCA滚环扩增中用到的酶的问题已有1人参与
|
||
| 我看到都是用phi29这种酶来做滚还扩增，用KF聚合酶可以做吗，以及这两种酶之间有什么区别？有做过的前辈可以分享一下吗。 |
回复此楼» 猜你喜欢
讨厌酒桌文化
已经有9人回复
-
入职高校3年发表10+SCI，尽人事听天命
已经有52人回复
-
统计一下：硕士毕业答辩后的谢师宴是学生出钱，还是老师出钱？
已经有27人回复
-
投稿的时候编辑发来邮件说作者机构信息没填写怎么办
已经有7人回复
-
年年想打听，年年打听不到。。
已经有10人回复
-
前些天开会有个人见到人就搞关系，一查此人全是MDPI/Hindawi论文，鄙视!
已经有17人回复
-
为什么美国要封锁华为而不封锁丘C同呢？
已经有16人回复
-
B口人才项目
已经有23人回复
-
实验室太吵闹，无法安静学习，怎么办？
已经有22人回复
-
化学B02口青基 代表作都是什么水平的？向大佬求助
已经有19人回复
7楼2020-10-12 20:12:27
Tiriosh
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 18585.3
- 散金: 3123
- 红花: 66
- 帖子: 3365
- 在线: 5857.4小时
- 虫号: 2417244
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特点是需要聚合酶持续的把之前生成的双开“顶开”，也就是说需要具有strand displacement性能。根据NEB官网信息，KF是Moderate strand displacement activity，感觉应该可以做RCA但是可能效率会有影响。与之相对，phi29是strong strand displacement activity。 做RCA用的酶，除了strand displacement性能之外还会考虑exonuclease activity性能，是否具备这一性能对于RCA的实验细节有影响。KF不具备外切酶活性（以NEB官网说明为准，来源不同话可能性能有所不同）那么对primer的处理就需要保证其3'端是结核在circular tempalte上，通常的做法是用外切酶trim一下，这也要看你的实验设计咯。 此外，phi29的一个很大的问题是其最适温度是30°，所以反应速度会慢一些。如果你是处于提高反应温度考虑而换酶的话，推荐你使用EquiPhi29，是phi29的热稳定版。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
炸鱼条yy2楼2019-10-08 20:48:04
3楼2019-10-09 09:08:34
Tiriosh
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 18585.3
- 散金: 3123
- 红花: 66
- 帖子: 3365
- 在线: 5857.4小时
- 虫号: 2417244
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
4楼2019-10-09 14:53:14
10