| 查看: 4804 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于PCR产物直接进行的平末端连接问题 已有1人参与
|
||
|
请问大家，kod，pfu等高保真聚合酶扩增的片段为平末端，能否直接连接到使用平末端内切酶切开的载体上？ 还有下面几个问题请教大家： 1. T4 DNA聚合酶可以连接内切酶切口3'-OH和5'-P，该5'-P为一个磷酸。而PCR扩增产物5'端有3个P，这样能不能和载体上的3'-OH连接上。 2. 我看了一些资料上平末端连接需要载体去磷酸化，并且插入片段要进行磷酸化，请问插入片段的磷酸化是不是必要的，因为磷酸化的相对成本比较高。 问题有点长，麻烦各位耐心阅读。谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
5楼2020-03-11 15:25:31
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2019-09-25 22:27:37
woshishui916
木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 8212.4
- 散金: 70
- 红花: 3
- 帖子: 1800
- 在线: 301.9小时
- 虫号: 335922
- 注册: 2007-03-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
3楼2019-09-26 00:12:50
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 应助指数+1, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-09-26 18:12:37
洛洛洛洛洛果: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2019-09-26 20:04:00
洛洛洛洛洛果: 金币+5, ★★★很有帮助 2019-09-28 10:14:37
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 应助指数+1, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-09-26 18:12:37
洛洛洛洛洛果: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2019-09-26 20:04:00
洛洛洛洛洛果: 金币+5, ★★★很有帮助 2019-09-28 10:14:37
|
高保真聚合酶PCR产物可以连接平端载体。 天然的质粒都是磷酸化的，所以自制载体时最好去磷酸化一下，目的是为了防止载体自连。目的片段磷酸化，目的也是为了连接效率更高，但此步骤不是必要的。 正常我们做连接，都是PCR产物纯化后，按一定比例连载体。另外T4 DNA连接酶连接时间比较长，我们实验室现在用的都是TOPO载体，速度快阳性率高，楼主可以自行了解下。 |
4楼2019-09-26 09:50:10
