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面包树129

新虫 (小有名气)

[交流] 胶回收后测序提示有高级结构

对PCR凝胶电泳使用天根生物试剂盒进行胶回收,回收后送去测序,结果显示双链有高级结构,一共测序4个样,3个样双链有高级结构,一个单链有高级结构。之前不做胶回收直接将pcr样品测序,从来没有出现过这个情况。请问是不是胶回收过程导致这个结果,哪个步骤容易出现dna结构变化

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longyueling

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果你用PCR样品送到公司测序,公司会跑胶分离回收,由于生物公司做胶回收技术成熟且用的试剂也不差,所以结果会比较理想。您自己回收存在高级结构的问题可能是由于您技术不娴熟,中间存在引入高级结构的步骤以及DNA被污染的风险,而且国产的试剂难免效果没有进口的好。建议您这边做完胶回收后用1uL的样品跑个鉴定胶,确定你回收的样品大小和浓度合适你在寄到公司去。
Get busy living, or get busy dying
3楼2019-08-07 16:30:40
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hooah

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你还真相信这些测序公司的说明?就是做不出来,给一个理由而已

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2楼2019-07-22 12:51:27
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面包树129

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by longyueling at 2019-08-07 16:30:40
如果你用PCR样品送到公司测序,公司会跑胶分离回收,由于生物公司做胶回收技术成熟且用的试剂也不差,所以结果会比较理想。您自己回收存在高级结构的问题可能是由于您技术不娴熟,中间存在引入高级结构的步骤以及DN ...

最近又进行了两次实验,胶回收之后跑电泳条带很亮位置也正常,送样测序后显示27 F的单链全是高级结构,怀疑是不是引物的问题,如果引物稀释没有使用新打的去离子水,会有这么大的影响吗?另外引物干粉有可能超过1年了,但是反向引物也是同时合成的呀,为什么反向的测序结果正常呢,焦头烂额中,还望您不吝赐教,谢谢。另外我们PCR的体系是50微升的,从电泳条带亮度看这个量回收得到的产物浓度没有问题

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4楼2019-08-19 11:37:09
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王小笑er

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我用takara的胶回收从来没有出现过类似问题

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5楼2019-08-19 13:06:34
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