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胶回收后测序提示有高级结构
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对PCR凝胶电泳使用天根生物试剂盒进行胶回收，回收后送去测序，结果显示双链有高级结构，一共测序4个样，3个样双链有高级结构，一个单链有高级结构。之前不做胶回收直接将pcr样品测序，从来没有出现过这个情况。请问是不是胶回收过程导致这个结果，哪个步骤容易出现dna结构变化 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2019-07-22 12:51:27
longyueling
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3楼2019-08-07 16:30:40
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最近又进行了两次实验，胶回收之后跑电泳条带很亮位置也正常，送样测序后显示27 F的单链全是高级结构，怀疑是不是引物的问题，如果引物稀释没有使用新打的去离子水，会有这么大的影响吗？另外引物干粉有可能超过1年了，但是反向引物也是同时合成的呀，为什么反向的测序结果正常呢，焦头烂额中，还望您不吝赐教，谢谢。另外我们PCR的体系是50微升的，从电泳条带亮度看这个量回收得到的产物浓度没有问题 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2019-08-19 11:37:09
5楼2019-08-19 13:06:34
longyueling
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之前测序正常的时候用的引物也是你们自己合成的？那就不是引物设计的问题，你既然怀疑了就再稀释一次测序看看结果验证一下。有的时候公司测序出现该问题确实会重新稀释引物 发自小木虫Android客户端 |
6楼2019-08-19 22:27:43
7楼2019-10-10 09:34:18