| 查看: 1607 | 回复: 6 | ||
MAS_rice至尊木虫 (著名写手)
|
[求助]
构建pET29a原核表达载体 已有1人参与
|
|
构建pET29a原核表达载体时，只需要构建目的基因和6×his的融合蛋白，因此用Nde1和Xho1把S-tag和thrombin site也切掉了，通过同源重组把目的基因重组到pET29a，这时候表达蛋白就多了一个ATG，相当于表达蛋白开始有两个甲硫氨酸，但是如果构载体时把ATG去掉，那么正确的蛋白就只有一个Met，所以，请问是否需要去掉ATG，还是融合蛋白多一个Met没有关系呢？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
2楼2019-06-03 15:35:32
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
3楼2019-06-03 16:16:33
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:23
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:23
|
楼主是用的Gibson克隆吗？如果是，设计引物的时候不要目的基因的第一个密码子，从第二个密码子开始扩增。另一个疑问，如果是用Nde I酶切载体，理论上是不存在ATG了啊，因为你是用的重组克隆方式，而不是酶切连接方式。所以需要好好看看你的设计。另，楼主能不能把这个载体送给我？或者跟我换一个？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-06-04 22:18:48
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
|
Infusion 重组，设计引物的时候重新生成了酶切位点，我去掉了片段上的第一个ATG，因此表达蛋白从第一个Met开始的，后面6xhis融合表达正确。其次，大家都说前面多一个Met是没有关系的，但是我还是去掉了。质粒我们可以交换啊  发自小木虫IOS客户端 |
5楼2019-06-05 01:23:36
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
6楼2019-06-05 06:09:58
tongbujing 
禁言 (初入文坛)
emuch: 屏蔽内容, 违规存档, 违规发布联系方式 2019-06-17 09:51:58
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2019-06-16 16:31:53
