应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建pET29a原核表达载体
71/1返回列表
查看: 1617  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 构建pET29a原核表达载体 已有1人参与

构建pET29a原核表达载体时，只需要构建目的基因和6×his的融合蛋白，因此用Nde1和Xho1把S-tag和thrombin site也切掉了，通过同源重组把目的基因重组到pET29a，这时候表达蛋白就多了一个ATG，相当于表达蛋白开始有两个甲硫氨酸，但是如果构载体时把ATG去掉，那么正确的蛋白就只有一个Met，所以，请问是否需要去掉ATG，还是融合蛋白多一个Met没有关系呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
1楼 2019-06-03 13:39:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
多一个问题不大

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-06-03 15:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-06-03 15:35:32
多一个问题不大

那如果去掉了，也可以吗？His标签正确融合表达的。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
3楼2019-06-03 16:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:23
楼主是用的Gibson克隆吗？如果是，设计引物的时候不要目的基因的第一个密码子，从第二个密码子开始扩增。另一个疑问，如果是用Nde I酶切载体，理论上是不存在ATG了啊，因为你是用的重组克隆方式，而不是酶切连接方式。所以需要好好看看你的设计。另，楼主能不能把这个载体送给我？或者跟我换一个？

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
4楼2019-06-04 22:18:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2019-06-04 22:18:48
楼主是用的Gibson克隆吗？如果是，设计引物的时候不要目的基因的第一个密码子，从第二个密码子开始扩增。另一个疑问，如果是用Nde I酶切载体，理论上是不存在ATG了啊，因为你是用的重组克隆方式，而不是酶切连接方式 ...

Infusion 重组，设计引物的时候重新生成了酶切位点，我去掉了片段上的第一个ATG，因此表达蛋白从第一个Met开始的，后面6xhis融合表达正确。其次，大家都说前面多一个Met是没有关系的，但是我还是去掉了。质粒我们可以交换啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
5楼2019-06-05 01:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:34
去掉完全没问题。Infusion和Gibson原理是一样的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
6楼2019-06-05 06:09:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongbujing

禁言 (初入文坛)
emuch: 屏蔽内容, 违规存档, 违规发布联系方式 2019-06-17 09:51:58
本帖内容被屏蔽
7楼2019-06-16 16:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 MAS_rice 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
[考研] 求调剂，数一英一274分 +4 小菲会努力 2026-03-08 4/200 2026-03-09 12:40 by 一定上岸哟_
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭