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MAS_rice至尊木虫 (著名写手)
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构建pET29a原核表达载体 已有1人参与
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构建pET29a原核表达载体时，只需要构建目的基因和6×his的融合蛋白，因此用Nde1和Xho1把S-tag和thrombin site也切掉了，通过同源重组把目的基因重组到pET29a，这时候表达蛋白就多了一个ATG，相当于表达蛋白开始有两个甲硫氨酸，但是如果构载体时把ATG去掉，那么正确的蛋白就只有一个Met，所以，请问是否需要去掉ATG，还是融合蛋白多一个Met没有关系呢？ 发自小木虫IOS客户端 |
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wuhu0612331
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2楼2019-06-03 15:35:32
MAS_rice
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3楼2019-06-03 16:16:33
snoopyzxx
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:23
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-06-06 07:50:23
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楼主是用的Gibson克隆吗？如果是，设计引物的时候不要目的基因的第一个密码子，从第二个密码子开始扩增。另一个疑问，如果是用Nde I酶切载体，理论上是不存在ATG了啊，因为你是用的重组克隆方式，而不是酶切连接方式。所以需要好好看看你的设计。另，楼主能不能把这个载体送给我？或者跟我换一个？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-06-04 22:18:48
MAS_rice
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Infusion 重组，设计引物的时候重新生成了酶切位点，我去掉了片段上的第一个ATG，因此表达蛋白从第一个Met开始的，后面6xhis融合表达正确。其次，大家都说前面多一个Met是没有关系的，但是我还是去掉了。质粒我们可以交换啊  发自小木虫IOS客户端 |
5楼2019-06-05 01:23:36
snoopyzxx
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6楼2019-06-05 06:09:58
tongbujing 
禁言 (初入文坛)
emuch: 屏蔽内容, 违规存档, 违规发布联系方式 2019-06-17 09:51:58
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7楼2019-06-16 16:31:53