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skynet999新虫 (初入文坛)
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克隆小白有问题请教～～～ 平板无菌落TT
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求助盆友们～ 最近做了一个月的cloning无果… 很悲伤 详情如下： 载体10787bp EcoRI 和BglII双酶切 酶切位点很近 都是NEB的酶 取5ugDNA 50ul体系 酶切后成功胶回收 浓度大概160ng/ul PCR产物200bp 为了提高片段浓度 合并了几次pcr产物 然后胶回收 过夜双酶切 也用的50ul体系 酶切后用PCR产物纯化Kit 得到PCR产物浓度大概200ng/ul 连接用了20ul体系 T4连接酶1ul 载体4ul PCR产物6ul 室温连接两小时后转化 第二天平板特别干净 无克隆菌落… 这是第三次做这个实验了 之前两次也是没有克隆 不过加的载体和PCR产物量比较少 所以这次加大量 还是无果… 表示不知道什么原因 每次跑胶看条带也都很正常 实在找不到症结所在 TT 求助大家伙儿……… 发自小木虫IOS客户端 |
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