应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 克隆小白有问题请教～～～ 平板无菌落TT
61/1返回列表
查看: 1240  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

skynet999

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆小白有问题请教～～～ 平板无菌落TT

求助盆友们～ 最近做了一个月的cloning无果… 很悲伤 详情如下：

载体10787bp EcoRI 和BglII双酶切 酶切位点很近 都是NEB的酶 取5ugDNA  50ul体系 酶切后成功胶回收 浓度大概160ng/ul

PCR产物200bp 为了提高片段浓度 合并了几次pcr产物 然后胶回收 过夜双酶切 也用的50ul体系 酶切后用PCR产物纯化Kit 得到PCR产物浓度大概200ng/ul

连接用了20ul体系 T4连接酶1ul 载体4ul PCR产物6ul 室温连接两小时后转化 第二天平板特别干净 无克隆菌落… 这是第三次做这个实验了 之前两次也是没有克隆 不过加的载体和PCR产物量比较少 所以这次加大量 还是无果… 表示不知道什么原因 每次跑胶看条带也都很正常 实在找不到症结所在 TT 求助大家伙儿………

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-05-05 17:34:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sannny

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用Gibson无缝克隆吧，包你一次成功。相当简单啊。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-05-05 17:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没连接上？还是抗性弄错了？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-05-05 18:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skynet999

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木元雨 at 2019-05-05 18:02:18
没连接上？还是抗性弄错了？

抗性肯定没错 连没连上倒是没有验证…… 感觉不应该是没连上呀

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-05-06 03:38:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶回收后用仪器测定的浓度吗？有没有跑胶看看，我建议多回收几管跑胶预测浓度
赞一下 回复此楼
5楼2019-05-06 09:00:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by skynet999 at 2019-05-06 03:38:31
抗性肯定没错 连没连上倒是没有验证…… 感觉不应该是没连上呀
...

有没有连上，做对照实验就知道了。把阳性对照和阴性对照都做下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2019-05-06 11:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 skynet999 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +4 一鸭鸭哟 2026-03-14 5/250 2026-03-14 18:16 by 学员Gtwj7W
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 26考研求调剂b区高校 +3 北陌追雪 2026-03-08 4/200 2026-03-14 03:47 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天大化工（085600）调剂总分338 +6 蔡大美女 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:46 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +4 Ncdx123456 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:32 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 0817化学工程319求调剂 +8 lv945 2026-03-08 10/500 2026-03-12 05:26 by wll0811
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
[考研] 0817找调剂 +6 kk扛 2026-03-08 6/300 2026-03-09 06:38 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭