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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳拖尾
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Misterboy

铁虫 (正式写手)

[求助] 电泳拖尾 已有2人参与

用MixTaq酶PCR，跑电泳没问题,有目标产物，用高保真酶PCR后，50uL全部电泳，准备胶回收纯化DNA，可是电泳完了，产物严重拖尾，没有清晰的目的条带，请问这是怎么回事？请求大神解答@飞约疯人院@biostar2009@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2019-04-07 19:24:58
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Misterboy

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by KM石头 at 2019-04-08 15:54:14
楼主用的是哪家的高保真酶，退火温度好高啊，我用takara的高保真酶，一般是55度，最高56，57度

我是在筛选条件，发现只有65左右时才会合成目的片段

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6楼2019-04-09 09:10:20
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KM石头

金虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-04-09 22:04:02
给楼主一些建议吧，不敢说一定能解决问题。1.更换电泳液 2.调整PCR体系，高保真酶模板加多了可能出现类似情况 3.可以考虑提高一下退火温度

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2楼2019-04-08 00:25:25
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Misterboy

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by KM石头 at 2019-04-08 00:25:25
给楼主一些建议吧，不敢说一定能解决问题。1.更换电泳液 2.调整PCR体系，高保真酶模板加多了可能出现类似情况 3.可以考虑提高一下退火温度

谢谢答复，电泳前已经更换了TAE，退火温度已经65度了，现在换了一种高保真酶在做，希望能做出来吧

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3楼2019-04-08 13:06:45
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KM石头

金虫 (正式写手)
楼主用的是哪家的高保真酶，退火温度好高啊，我用takara的高保真酶，一般是55度，最高56，57度

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Misterboy
4楼2019-04-08 15:54:14
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