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青青宁呢

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[求助] 请问有用过pPICZA这个质粒的嘛？已有2人参与

请问有用过pPICZA这个质粒的嘛？大家做双酶切线性化的时候用的什么酶？以及测序用的引物是什么呢？有关于这个质粒的很多问题想咨询一下。

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1楼 2019-03-02 12:52:07

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渊博震天

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Yeast Display

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-02 16:13:15

线性化用的单酶切来的，有三个酶切位点可供选择，分别是SacI, PmeI，BstI；5' 测序引物及序列: 5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列: 3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′

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2楼2019-03-02 14:37:38

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biosci

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有说明书说的很详细，看不明白可以再来问我

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3楼2019-03-04 22:41:08

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青青宁呢

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2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-03-02 14:37:38
线性化用的单酶切来的，有三个酶切位点可供选择，分别是SacI, PmeI，BstI；5' 测序引物及序列: 5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列: 3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′

我用的是Kpn1和Apa1进行的双酶切，但是后面连接转化后不长菌。有人说，双酶切的位点距离小于50bp，酶切很容易不成功或者是单酶切。

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4楼2019-03-06 18:08:59

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