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青青宁呢

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有用过pPICZA这个质粒的嘛? 已有2人参与

请问有用过pPICZA这个质粒的嘛?大家做双酶切线性化的时候用的什么酶?以及测序用的引物是什么呢?有关于这个质粒的很多问题想咨询一下。

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werq63

金虫 (著名写手)

不长菌说明酶切成功了,切不开或者单切会长很多的

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6楼2019-03-06 19:44:11
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-02 16:13:15
线性化用的单酶切来的,有三个酶切位点可供选择,分别是SacI, PmeI,BstI;5' 测序引物及序列:        5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列:        3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′
2楼2019-03-02 14:37:38
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


有说明书说的很详细,看不明白可以再来问我

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3楼2019-03-04 22:41:08
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青青宁呢

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-03-02 14:37:38
线性化用的单酶切来的,有三个酶切位点可供选择,分别是SacI, PmeI,BstI;5' 测序引物及序列:        5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列:        3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′

我用的是Kpn1和Apa1进行的双酶切,但是后面连接转化后不长菌。有人说,双酶切的位点距离小于50bp,酶切很容易不成功或者是单酶切。

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4楼2019-03-06 18:08:59
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