应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请问有用过pPICZA这个质粒的嘛？
121/2返回列表12下一页
查看: 1751  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

青青宁呢

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有用过pPICZA这个质粒的嘛？ 已有2人参与

请问有用过pPICZA这个质粒的嘛？大家做双酶切线性化的时候用的什么酶？以及测序用的引物是什么呢？有关于这个质粒的很多问题想咨询一下。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-02 12:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-02 16:13:15
线性化用的单酶切来的，有三个酶切位点可供选择，分别是SacI, PmeI，BstI；5' 测序引物及序列:        5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列:        3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2019-03-02 14:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
有说明书说的很详细，看不明白可以再来问我

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-03-04 22:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青宁呢

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-03-02 14:37:38
线性化用的单酶切来的，有三个酶切位点可供选择，分别是SacI, PmeI，BstI；5' 测序引物及序列:        5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′
3' 测序引物及序列:        3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′

我用的是Kpn1和Apa1进行的双酶切，但是后面连接转化后不长菌。有人说，双酶切的位点距离小于50bp，酶切很容易不成功或者是单酶切。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-06 18:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青宁呢

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2019-03-04 22:41:08
有说明书说的很详细，看不明白可以再来问我

我用的是Kpn1和Apa1进行的双酶切，但是后面连接转化后不长菌。有人说，双酶切的位点距离小于50bp，酶切很容易不成功或者是单酶切。我现在不知道自己的问题到底出在哪里

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2019-03-06 18:09:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
不长菌说明酶切成功了，切不开或者单切会长很多的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2019-03-06 19:44:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
看看是不是插入片段的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2019-03-06 19:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青宁呢

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by werq63 at 2019-03-06 19:44:11
不长菌说明酶切成功了，切不开或者单切会长很多的

插入片段我连接到pmd18载体中测序了，没有问题。如果没切开的话应该会长，如果是单酶切呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2019-03-06 20:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
单切自连很好连的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2019-03-06 22:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青宁呢

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by werq63 at 2019-03-06 22:07:39
单切自连很好连的

那你觉得还可能是哪里出现问题呢？我做了快半个月了。就是连不上。谢谢谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2019-03-06 22:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 青青宁呢 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 00:28 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭