应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » XhoI 单酶切，再连接，为什么都是假阳性？
51/1返回列表
查看: 1167  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

安静的位置i

金虫 (小有名气)

[交流] XhoI 单酶切，再连接，为什么都是假阳性？

急！载体和目的片段都用XhoI单酶切后，再去磷酸化，再与目的片段连接，最后转化后长出50个克隆，结果都是假阳性，为什么啊？
        酶切体系：XhoI：2uL（Takara）
                       质粒：10uL
                       buffer:4uL
                       ddH2O:24uL
        37℃ 酶切3h

       去磷酸化：SAP：0.5uL（Promega）
                       buffer:3uL
                       ddH2O:7uL
             质粒酶切回收：20uL     

        37℃ 水浴15min 再65℃水浴15min，产物纯化回收
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-07 13:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士
做个连接梯度。我曾有此单酶切连接，怎么都连不进去，后来把载体和基因的用量颠倒了下，结果长了一板子，全是阳性。
赞一下 回复此楼
123
9楼2009-05-08 10:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
安静的位置i(金币+2,VIP+0): 5-8 10:48
1、没有切动。takara的工具酶都很垃圾。
2、加入酶切的质粒过多，你要根据酶活定义来调整加入质粒的量，而不是什么多少ul，这么说没任何意义
3、去磷酸化不彻底，但是promega的酶还是ok的，所以我觉得1、2的可能性高
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-05-07 13:55:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangqshijf2003

金虫 (小有名气)
质粒纯度和浓度不详，纯度太低切不动，浓度太高酶切不充分，去磷酸化不彻底
赞一下 回复此楼
3楼2009-05-07 14:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuotuozw

银虫 (小有名气)
★
安静的位置i(金币+1,VIP+0): 5-11 19:19
XhoI 虽然是粘端，但其连接效率等于平端，所以你按照平端的连接条件吧！
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-07 14:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +3 18419759900 2026-03-25 3/150 2026-03-25 23:20 by peike
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭