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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌高密度发酵溶氧控制
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14026sun

新虫 (初入文坛)

[交流] 大肠杆菌高密度发酵溶氧控制

请问大家做大肠杆菌工业发酵时，一定要控制溶氧在一定水平以上吗？一般罐上培养前几个小时  因为菌体密度比较低，一般还有溶氧显示，可是长到OD600＝10左右，受限于通气量和搅拌就不会有溶氧显示了。
那么发酵全程要求有溶氧显示是怎么实现的呢？只是简单的提高通气、搅拌？还是要通过精准的控制碳源或者氮源流加来实现？
另外想请教一下，大肠杆菌高密度发酵实现的关键是什么？微量元素？通气量？还是什么？先谢谢大家！期待……

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1楼 2019-02-10 20:33:31
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提高溶氧可以通过增加通气，提高搅拌和增加罐压实现。
如果实在不能维持，就只能将调整流加糖速度使残糖保持到比较低才行。
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14026sun
4楼2019-02-13 22:14:47
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14026sun

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuweitao at 2019-02-13 22:14:47
提高溶氧可以通过增加通气，提高搅拌和增加罐压实现。
如果实在不能维持，就只能将调整流加糖速度使残糖保持到比较低才行。

多谢！请问有没有做过高密度的发酵？通气量要到多少vvm才可以，1vvm是不是有点低？另外高密度发酵是不是一定要流加微量元素呢？

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5楼2019-02-14 12:00:57
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roger524

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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小冀-: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-04 12:35:17
高密度发酵一般有专门的配方，补料配方也是需要摸索的
LB配方发酵的OD不会太好
溶氧控制都是采用转速、通气还有控制补料速度来决定
通气量要求不能太高，1VV是不够的，20L以下的罐子可以提高到3VV，但是到了大罐考虑到能耗问题，一般控制通气在1.2-1.5
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6楼2019-03-04 11:35:43
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14026sun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by roger524 at 2019-03-04 11:35:43
高密度发酵一般有专门的配方，补料配方也是需要摸索的
LB配方发酵的OD不会太好
溶氧控制都是采用转速、通气还有控制补料速度来决定
通气量要求不能太高，1VV是不够的，20L以下的罐子可以提高到3VV，但是到了大罐 ...

多谢

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7楼2019-03-06 23:13:14
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白白白黑呀

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问各位
小弟最近在做高密度发酵，因为之前实验室都没做过，所以在摸索阶段。目前遇到的问题是菌体浓度上不去，OD600最大只能到30~40左右。

5L发酵罐，培养基主要成分：20g/L酵母浸粉，5g/L葡萄糖，10g/L NaCl, 15g/L磷酸氢二钾，5g/L磷酸二氢钾

通压缩空气

菌种：BL21(DE3)，做重组蛋白表达（无毒）

补料：葡萄糖，pH反馈补料

37℃培养6h左右初糖耗尽，这时候转速达到1000rpm，通气量3vvm，溶氧只有20%左右，OD600只有15左右，后面接着补料，OD600达到25左右就长不上去了，溶氧也只有2%，此时降温到28度诱导，最终也只涨到35左右。

请教各位大神如何改进实现高密度啊？看别人都可以做到OD600在100以上的。。。
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8楼2019-05-22 10:19:47
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14026sun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 白白白黑呀 at 2019-05-22 10:19:47
请问各位
小弟最近在做高密度发酵，因为之前实验室都没做过，所以在摸索阶段。目前遇到的问题是菌体浓度上不去，OD600最大只能到30~40左右。

5L发酵罐，培养基主要成分：20g/L酵母浸粉，5g/L葡萄糖，10g/L NaCl ...

你的培养周期现在是多少？建议试试溶氧反馈补料，pH反馈没法实现溶氧显示的问题，最近也在试5L罐  28h能长到50左右了，共同学习

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9楼2019-05-30 01:58:18
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tianguiwei

新虫 (初入文坛)
★
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新手报到，请多指教
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10楼2021-08-11 13:59:38
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time882楼
2019-02-10 21:12   回复  
14026sun(金币+5): 谢谢参与
14026sun3楼
2019-02-11 10:18   回复  
引用回帖:
2楼: Originally posted by time88 at 2019-02-10 21:12:43

额。。。 发自小木虫IOS客户端
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