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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 30K的重组质粒,采用top10转化和提取的质粒,用各种内切酶都切不开是什么原因?

试了好几种酶,都是切不开这个重组质粒,我用自己设计的酶切位点,也是切不开。

但是跑胶时显示的条带位置不一样,只有一条带。正常应该切开很多条带,不知道什么原因?

我自己查询,分子量较大时可能是紧密型质粒,紧密型质粒如何切开呢?

我通过电泳发现自己构建的质粒成功了,但是现在不能通过酶切验证,很苦恼。
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyuanqing at 2018-12-19 12:52:10
通过电泳能发现你的质粒构建成功?怎么发现的?

你知道怎么能把他切开吗?我现在的问题是不能通过酶切图谱验证。
4楼2018-12-19 13:22:42
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

通过电泳能发现你的质粒构建成功?怎么发现的?

发自小木虫Android客户端
2楼2018-12-19 12:52:10
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuyuanqing at 2018-12-19 12:52:10
通过电泳能发现你的质粒构建成功?怎么发现的?

通过质粒大小和PCR扩增
3楼2018-12-19 13:21:58
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

有可能是酶切位点发生变化,导致原有酶切位点不复存在。

发自小木虫Android客户端
5楼2018-12-19 13:30:22
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